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DNA 合成的原理
Oligo DNA的人工化學(xué)合成始于50年代初期，1980年，全自動(dòng)的固相DNA合成儀面市后，使得快速、高效合成Oligo DNA成為可能，這大大地推動(dòng)了生物工程技術(shù)的蓬勃發(fā)展?，F(xiàn)在一般都采用β-乙腈亞磷酰胺化學(xué)合成Oligo DNA，合成時(shí)從3' →5' 方向進(jìn)行，通常3' 端的第一個(gè)堿基結(jié)合在Glass擔(dān)體 (Controlled Pore Glass，CPG)上。合成的詳細(xì)過程見下圖，現(xiàn)簡(jiǎn)要說明如下：
1. Step1：脫掉附加在CPG擔(dān)體上的第一個(gè)堿基5' -OH基團(tuán)上的保護(hù)基 (DMTr)，準(zhǔn)備附加下一個(gè)新的堿基；
2. Step2：活化新的堿基單體 (Phosphoramidite)，準(zhǔn)備與第一個(gè)堿基進(jìn)行反應(yīng)；
3. Step3：第二個(gè)堿基與第一個(gè)堿基發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)；
4. Step4：將沒有反應(yīng)的第一個(gè)堿基的5' -OH加帽封死 (Capping)，使其不再進(jìn)一步參與反應(yīng)；
5. Step5：將核苷亞磷酸酯氧化成更穩(wěn)定的核苷磷酸酯 (即將三價(jià)磷氧化成五價(jià)磷)。
6. 重復(fù)進(jìn)行Step1～Step5的循環(huán)，直至合成完所需的Oligo DNA序列。
7. 合成結(jié)束后，將Oligo DNA分子從CPG上切下，再進(jìn)行進(jìn)一步的純化。
 
 
圖1 Oligo DNA合成原理。N1代表第一個(gè)堿基，N2代表第二個(gè)堿基，依此類推。
 
 

頁面更新：2017-04-14 09:33:30