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產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

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不同純化級(jí)別制品的選擇指導(dǎo)

DNA合成時(shí)，每個(gè)堿基依次偶聯(lián)到增長(zhǎng)中的鏈上。每一個(gè)循環(huán)都會(huì)有一個(gè)小比例的Oligos鏈不能被延伸，合成產(chǎn)物是一個(gè)由目的序列與失敗序列組成的混合物。隨著Oligos長(zhǎng)度的增加，失敗序列的相對(duì)比例在增大。
Oligos從支持體上切下后，需要首先脫去堿基上的保護(hù)基，之后進(jìn)行精制將失敗序列從全長(zhǎng)序列中分離出去。需要的Oligos純度水平取決于失敗序列的存在是否會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響。有些應(yīng)用只允許目的序列存在，而對(duì)于有些應(yīng)用，較短序列存在（n-1,n-2…）不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

■ 本公司提供以下級(jí)別的制品

◇ OPC純化：
OPC純化利用裝有C18樹(shù)脂的Cartridge小柱純化制品，分離的基礎(chǔ)是依據(jù)全長(zhǎng)序列（帶有DMT基團(tuán)）與失敗序列（沒(méi)有DMT基團(tuán)）疏水性的差別。本純化方法提供的純度水平，通常為85-95%。
對(duì)于大多數(shù)分辨率要求比較高的應(yīng)用，OPC純化提供了必要純度水平的制品。純化后的制品可用于測(cè)序、克隆、PCR、突變等。
◇ PAGE純化：
PAGE純化分離依據(jù)的是分子量與電荷。在電場(chǎng)作用下，不同長(zhǎng)度序列遷移的速率不同。
將Oligo DNA/RNA粗制品上樣到聚丙烯酰胺凝膠板上，采用適宜的凝膠濃度電泳，回收目的帶進(jìn)行精制。
目的序列較短時(shí)，N-1失敗序列會(huì)被有效去除；序列更長(zhǎng)（＞60 mer）時(shí)，PAGE是非常好的純化方式。由于具有很高的分辨率，PAGE純化提供的制品純度接近于離子交換HPLC。
◇ 反相HPLC純化：
依據(jù)的原理同OPC純化，根據(jù)被分離物質(zhì)疏水性的不同，將不同長(zhǎng)度的、或?qū)в行揎椈鶊F(tuán)與不帶修飾基團(tuán)的Oligos分離開(kāi)來(lái)。
反相HPLC在純化帶有疏水性修飾基團(tuán)的目的序列與不帶修飾基團(tuán)的失敗序列時(shí)，是非常有效的純化方法；但分離N-1失敗序列的能力較差，遠(yuǎn)不如離子交換HPLC的分辨能力。
◇ 離子交換HPLC純化：
根據(jù)分子所帶負(fù)電荷的多少，利用梯度洗脫，將目的序列與失敗序列分離開(kāi)來(lái)。離子交換HPLC的分辨率非常高，能分離掉N-1失敗序列，得到高純度的產(chǎn)品（≥95%，序列特殊時(shí)純度會(huì)有所降低）。
◇ HPLC+PAGE純化：
Oligos經(jīng)過(guò)HPLC和PAGE雙重純化，利用兩種不同的分離原理純化過(guò)的Oligos具有非常高的純度。

此外要補(bǔ)充說(shuō)明的是，以上所述各級(jí)別制品的純度會(huì)隨著Oligo長(zhǎng)度及序列組成的不同而發(fā)生改變，Oligo長(zhǎng)度增加、序列特殊（形成高級(jí)結(jié)構(gòu)等），制品的純度會(huì)有所降低。

如果訂購(gòu)的Oligos序列特殊，本公司會(huì)根據(jù)實(shí)際情況選擇最優(yōu)的純化方式，PAGE、HPLC、或雙次純化，此時(shí)本公司將不再另行通知。

頁(yè)面更新：2019-08-29 16:29:36

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