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機構用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術服務信息

當前位置：首頁> 技術服務信息 > DNA測序服務 > 測序樣品的提供 > 測序樣品的提供
測序樣品的提供
■ 質粒DNA的測序
◇ Sample形態(tài)為提純質粒時
請注明載體名稱及結構情況、插入片段的長度及插入片段的酶切位點等情況，請?zhí)峁? μg以上提純的質粒DNA (濃度大于50 ng/μl)。如果提供質粒偏少需要我公司轉化制備時，收取質粒轉化制備費用。
 
■ PCR產(chǎn)物直接測序
◇ Sample形態(tài)為純化后的PCR產(chǎn)物時
請?zhí)峁┣心z回收純化后的PCR產(chǎn)物500 ng以上 (濃度大于25 ng/μl)，并請?zhí)峁舛?(濃度須正確) 大于3.2 pmol/μl的測序引物 20 μl以上。此外，請注明PCR產(chǎn)物的長度、引物的具體序列等情況。
◇ Sample形態(tài)為未純化的PCR產(chǎn)物時
請?zhí)峁?-5 μg的未純化PCR產(chǎn)物, 我們負責純化測序 (另收取純化費)。同時請?zhí)峁舛?(濃度須正確) 大于3.2 pmol/μl的測序引物 20 μl以上, 并請注明PCR產(chǎn)物的長度、引物的具體序列等情況。
◇ Sample形態(tài)為PCR模板DNA時
請?zhí)峁┻m量的模板DNA及用于PCR擴增的引物 (濃度大于3.2 pmol/μl約100 μl)。我公司負責PCR反應和PCR產(chǎn)物的純化及測序 (需收取PCR反應費及PCR產(chǎn)物的純化費) 。此外，請注明PCR產(chǎn)物的長度及引物的具體序列等情況。
◇ 注意事項
1. PCR產(chǎn)物直接測序成功的關鍵是PCR產(chǎn)物的純度，所以我公司提倡切膠回收PCR產(chǎn)物。如果有幾條PCR產(chǎn)物長度相近，用電泳膠也無法分開，此時的PCR產(chǎn)物便無法直接測序。這種情況建議把PCR產(chǎn)物克隆后測序。
2. PCR產(chǎn)物直接測序成功的另一要因是引物，不是能做PCR反應的引物便能測序。測序用引物要求較高，引物的3' 端必須與模板完全匹配，含有Mix堿基的引物一般不能測序 (特別是3' 端)。此外，測序引物長度一般為20個堿基左右，GC含量必須在 50-60%左右。而且，用于測序的引物一定要純，純度必須大于90%。
3. 在PCR擴增時，難以擴增 (擴增后的PCR帶較弱) 的PCR產(chǎn)物在測序時一般成功率較低。
4. 小于150 bp的PCR產(chǎn)物直接測序效果不好，請克隆后測序。
 
■ Cosmid、Fosmid中插入DNA片段的測序
請?zhí)峁┘兓蟮腄NA大于5 μg (因每個測序反應的用量需500 ng以上)。DNA必須注明濃度，并請?zhí)峁舛?(濃度須正確) 大于5 pmol/μl的引物10 μl以上。
 
■ 預混合樣品測序
將測序樣品和引物按照要求的濃度和量，事先混合好，取12 μl指定濃度的DNA模板和3 μl的引物（濃度為5 pmol/μl）混合（若使用公司的通用引物，只需要按照所要求的濃度提供12 μl的DNA模板就可以）。樣品和引物混合方法，請參考下表：
DNA類型 模板大小 濃度
(ng/μl) 		模板總量
(12 μl) 		引物濃度 引物總摩爾數(shù)
(3 μl) 		混合后的體積
(模板+引物)
已純化PCR產(chǎn)物 ﹤ 500 bp 3 ng/μl 36 ng 5 pmol/μl 15 pmol 15 μl
501 ~ 1,000 bp 4 ng/μl 48 ng
1,001 ~ 2,000 bp 6 ng/μl 72 ng
2,001 ~ 3,000 bp 12.5 ng/μl 150 ng
3,001 ~ 5,000 bp 20 ng/μl 240 ng
﹥ 5,001 bp 同質粒 同質粒
質粒 ﹤ 5 kb 25 ng/μl 300 ng 5 pmol/μl 15 pmol 15 μl
5 ~ 10 kb 50 ng/μl 600 ng
﹥ 10 kb 75 ng/μl 900 ng
 

頁面更新：2015-10-30 10:33:03