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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

無標(biāo)題文檔
   
  Takara Real Time PCR
  檢測(cè)技術(shù)服務(wù)		 地  址：大連開發(fā)區(qū)東北二街19號(hào)(116600)
電  話：0411-87643922(專線電話)
傳  真：0411-87619946，87621675
E-mail：pcr@takara.com.cn
 
  本公司對(duì)Sample的情況及結(jié)果保證嚴(yán)守秘密
   
 
Real Time PCR技術(shù)即是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。因其無需電泳，且具有快速性及定量性而倍受青睞。本公司承接利用Real Time PCR法進(jìn)行課題研究的技術(shù)服務(wù)，可以提供從引物設(shè)計(jì)合成開始，至Real Time PCR反應(yīng)檢測(cè)的一條龍技術(shù)服務(wù)，歡迎惠顧！
 
■ 服務(wù)項(xiàng)目
◇ 定性分析 (SNP分型解析等)
◇ 絕對(duì)定量
◇ 相對(duì)定量 (mRNA表達(dá)量分析)		 ◇ DNA Microarray數(shù)據(jù)確認(rèn)
◇ RNAi效果確認(rèn) (siRNA的篩選)
 
■ 檢測(cè)方法
嵌合熒光法，雙標(biāo)記熒光探針法，Cycling探針法。
 
■ Real Time PCR裝置
使用本公司Thermal Cycler Dice™ Real Time System、Life Technologies公司的ABI 7500 Fast及Roche的Lightcycler 480 II 等多種Real Time PCR裝置。
 
    服務(wù)項(xiàng)目說明
 
■ 定性分析
PCR反應(yīng)結(jié)束后的PCR產(chǎn)物無需電泳檢測(cè)，可以通過Real Time PCR方法，簡(jiǎn)單快速地對(duì)目的基因進(jìn)行高特異性、高靈敏度的檢測(cè)，同時(shí)閉管操作的實(shí)時(shí)檢測(cè)可以有效防止反應(yīng)產(chǎn)物的污染。本技術(shù)可以廣泛應(yīng)用于病毒、病原菌等致病微生物的檢測(cè)以及各種生物品種的鑒定等。
 
■ 絕對(duì)定量
絕對(duì)定量首先必須構(gòu)建與檢測(cè)樣品目的基因具有相同序列的標(biāo)準(zhǔn)品。使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品制作5個(gè)點(diǎn)以上的標(biāo)準(zhǔn)曲線后，可以使用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知濃度的檢測(cè)樣品進(jìn)行絕對(duì)量 (起始拷貝數(shù)) 分析。
 
■ 相對(duì)定量 (mRNA表達(dá)量分析)
基因表達(dá)的研究一般采用相對(duì)定量的方法。相對(duì)定量法必須對(duì)樣品的目的基因和參比基因同時(shí)分別進(jìn)行定量，然后求出對(duì)于參比基因的目的基因的相對(duì)量。通過對(duì)樣品間的目的基因的相對(duì)量進(jìn)行比較，可以對(duì)不同樣品間的mRNA進(jìn)行表達(dá)量分析。參比基因通常選用表達(dá)量相對(duì)恒定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通過同時(shí)對(duì)參比基因的實(shí)時(shí)檢測(cè)，可以對(duì)樣品之間由于起始細(xì)胞數(shù)不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量誤差進(jìn)行校正，達(dá)到在嚴(yán)格意義上對(duì)樣品之間的mRNA表達(dá)量進(jìn)行分析之目的。
 
    服務(wù)要求
 
◇ 如果您需要進(jìn)行此項(xiàng)服務(wù)，請(qǐng)?zhí)顚憽?/span>Takara Real Time PCR 檢測(cè)技術(shù)服務(wù)委托書”。填寫后通過傳真或E-mail發(fā)送給我們或當(dāng)?shù)卮砩獭?br /> ◇ 進(jìn)行mRNA表達(dá)量分析時(shí)，請(qǐng)寄送足量的并且保證純度的Total RNA (濃度在500 ng/μl以上，體積在 20 μl以上)。如果目的基因表達(dá)量低時(shí)，應(yīng)盡量提供更高濃度的Total RNA。
◇ 如果提供的材料為細(xì)胞或組織，DNA、RNA的提取費(fèi)用另收。 同時(shí)應(yīng)保證材料新鮮，動(dòng)物細(xì)胞數(shù)為106以上，動(dòng)物組織為100 mg以上。
 
    服務(wù)項(xiàng)目示例-以相對(duì)定量為例
 
■ 引物設(shè)計(jì)合成
具體情況請(qǐng)參見“Oligo DNA/RNA合成服務(wù)簡(jiǎn)要說明”的引物探針設(shè)計(jì)服務(wù)內(nèi)容。
 
如果想進(jìn)行單獨(dú)的引物探針設(shè)計(jì)合成服務(wù)，聯(lián)系電話：0411-87621671-504，E-mail：primer@takara.com.cn。
同時(shí)，官網(wǎng)中推出了qPCR引物探針設(shè)計(jì)工具，供購(gòu)買Takara qPCR試劑的會(huì)員免費(fèi)使用，詳見：Takara qPCR引物探針設(shè)計(jì)的使用流程。
 
■ 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
使用設(shè)計(jì)合成的引物，以Total RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，進(jìn)行Real Time PCR反應(yīng)，確認(rèn)引物模板的反應(yīng)性能。然后將cDNA進(jìn)行5個(gè)濃度梯度稀釋，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，以供進(jìn)一步定量分析使用。
 
■ Real Time PCR反應(yīng)及定量分析
對(duì)客戶提供的RNA Sample，進(jìn)行Real Time RT-PCR反應(yīng)，并進(jìn)行定量分析。用相對(duì)定量方法進(jìn)行定量分析時(shí)，要對(duì)管家基因等參比基因進(jìn)行同樣操作，用所得到的值進(jìn)行RNA量的校正，最后求得目的基因的相對(duì)表達(dá)量。
 
    價(jià)格 · 交貨期
 
服務(wù)項(xiàng)目 目錄價(jià) (元/ 基因/ 樣品) 交貨期*
定性分析 DNA 樣品 1～5 個(gè)樣品 200 3周
6～20 個(gè)樣品 150
21～50 個(gè)樣品 100
50 個(gè)以上樣品 詢價(jià)
RNA 樣品 1～5 個(gè)樣品 250
6～20 個(gè)樣品 200
21～50 個(gè)樣品 150
50 個(gè)以上樣品 詢價(jià)
絕對(duì)定量 DNA 樣品 1～5 個(gè)樣品 250 3～4周
6～20 個(gè)樣品 200
21～50 個(gè)樣品 150
50 個(gè)以上樣品 詢價(jià)
RNA 樣品 1～5 個(gè)樣品 300
6～20 個(gè)樣品 250
21～50 個(gè)樣品 200
50 個(gè)以上樣品 詢價(jià)
相對(duì)定量 RNA 樣品 1～5 個(gè)樣品 400 3～4周
6～20 個(gè)樣品 300
21～50 個(gè)樣品 200
50 個(gè)以上樣品 詢價(jià)
SNP分型解析 DNA 樣品 1～5 個(gè)樣品 250 3～4周
6～20 個(gè)樣品 200
21～50 個(gè)樣品 150
50 個(gè)以上樣品 詢價(jià)
 
■ 報(bào)價(jià)說明
◇ 以上技術(shù)服務(wù)報(bào)價(jià)是以提純的核酸 (即：DNA或RNA) 為起始材料設(shè)定的，如果需要進(jìn)行核酸純化時(shí)，費(fèi)用另計(jì)。
◇ 以上技術(shù)服務(wù)報(bào)價(jià)是針對(duì)采用嵌合熒光法的報(bào)價(jià)，如果實(shí)驗(yàn)采用雙標(biāo)記熒光探針或Cycling探針方法時(shí)，相應(yīng)的探針合成費(fèi)用另計(jì)，價(jià)格請(qǐng)具體垂詢。
◇ 以上技術(shù)服務(wù)報(bào)價(jià)不包括標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建費(fèi)用，如需進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建，費(fèi)用另計(jì)，價(jià)格請(qǐng)具體垂詢。
◇ 相對(duì)定量檢測(cè)時(shí)，客戶可選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線法或雙delta法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。但如果委托樣品數(shù)＜ 5 個(gè)時(shí)，我們會(huì)默認(rèn)為采用雙delta 法進(jìn)行分析，如選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線法，則需加收500元/基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線制作費(fèi)用。
◇ 相對(duì)定量檢測(cè)時(shí)，以上報(bào)價(jià)含一組管家基因的校正費(fèi)用，如需進(jìn)行多管家基因校正，費(fèi)用另計(jì)，價(jià)格請(qǐng)具體垂詢。
◇ 如因?qū)嶒?yàn)材料等非本公司原因造成某實(shí)驗(yàn)步驟失敗，使實(shí)驗(yàn)提前終止，已啟動(dòng)的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目仍正常收費(fèi)。
 
 

頁(yè)面更新：2024-04-10 15:58:48