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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

當(dāng)前位置：首頁> 產(chǎn)品選擇指南 > cDNA合成 & 克隆 > 感受態(tài)細(xì)胞 > 感受態(tài)細(xì)胞E.coli CJ236 Competent Cells
感受態(tài)細(xì)胞E.coli CJ236 Competent Cells
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說明書 數(shù)量
Takara 9053 E.coli CJ236 Competent Cells 100 μl × 10 ￥1,673
 
■ 制品內(nèi)容
E.coli CJ236 Competent Cells 100 μl × 10
pUC119 plasmid ( 0.1 ng/μl) 10 μl × 1
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium:      2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
 10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品說明
Takara公司在Hanahan's method基礎(chǔ)上進(jìn)行了改良，制備出E.coli CJ236 Competent Cells，當(dāng)1 ng pUC119轉(zhuǎn)化100 μl 細(xì)胞時(shí)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×107 cfu/μg。
E. coli CJ236 Competent Cells適用于制備含有dU的ssDNA。通過CJ236轉(zhuǎn)化后富集的ssDNA，可用于Kunkel法進(jìn)行定點(diǎn)突變。
 
■ 細(xì)胞濃度
1 - 2×109 Bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli CJ236 : dut1, ung1, thi-1, recA1 / pCJ105 (F' camr)
 
■ 保存
-80℃。
注意：如果不在-80℃下保存，轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。此時(shí)，在使用前，請使用附帶的pUC119對照質(zhì)粒來驗(yàn)證細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。不能液氮保存。
 
■ 轉(zhuǎn)化效率
轉(zhuǎn)入1 ng 的pUC119，涂于含有Amp+ 的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。
轉(zhuǎn)化效率 : >1 x 107 cfu/μg pUC119
 
■ 注意事項(xiàng)
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80℃冷凍取出后請立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 可使用microcentrifuge tubes代替Falcon tubes (CORNING #352059或352057)，但效率可能會(huì)降低。
3. 當(dāng)使用100 μl感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，加入不超過10 ng的高純度DNA樣品。否則轉(zhuǎn)化效率會(huì)降低。
4. 當(dāng)改變感受態(tài)細(xì)胞數(shù)量或tubes類型時(shí)，適當(dāng)調(diào)整反應(yīng)條件。例如，當(dāng)使用microcentrifuge tubes時(shí)，42℃放置60秒。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培養(yǎng)基。此時(shí)，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低。
   ·L-broth : Ingredient per liter water  
  Tryptone 10 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH調(diào)整pH到7.5并高壓滅菌。
   ·φ b-broth: Ingredient per liter water  
  Tryptone 20 g  
  Yeast extract 5 g  
  MgSO4·7H2O 5 g  
    用1 N KOH調(diào)整pH到7.5并高壓滅菌。
6. 稀釋時(shí)使用SOC培養(yǎng)基。
7. 建議在選擇培養(yǎng)基中加入 Chloramphenicol (30 μg/ml) 以保證F' 質(zhì)粒穩(wěn)定。
8. YT soft agar: Ingredient per 100 ml water  
  Tryptone 0.8 g  
  Yeast extract 0.5 g  
  NaCl 0.5 g  
    用1 N NaOH調(diào)整pH到7.6，加入agar至濃度為0.6%，并高壓滅菌。
9. YT-plate: Ingredient per liter water  
  Tryptone 8 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH調(diào)整pH到7.5，加入agar至濃度為1.5%，并高壓滅菌。
10. 制備感受態(tài)細(xì)胞。
11. 不建議將解凍的感受態(tài)細(xì)胞再次冷凍保存。但是，如果再次凍結(jié)不可避免，將細(xì)胞置于干冰/乙醇中迅速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低至少一個(gè)數(shù)量級(jí)。
 
 

頁面更新：2024-01-31 15:19:49