PrimeCap T7 RNA Polymerase(low dsRNA), HQ(high quality)可用于基礎(chǔ)研究,例如制備非臨床試驗的醫(yī)藥品原藥、開發(fā)符合GMP指南的醫(yī)藥品制造工藝以及開發(fā)RNA藥物等。本產(chǎn)品的組分中,不含人或動物源性成分以及β內(nèi)酰胺類化合物。
該酶具有與PrimeCap T7 RNA Polymerase (low dsRNA)(Code No. 2560A)同樣的性能,是改良的T7 RNA聚合酶,兼具Cap類似物依賴性RNA合成、低dsRNA生成和耐熱性(~52℃)的特點。使用了本酶和Cap類似物的體外轉(zhuǎn)錄 (IVT),可大量制備具有高加帽效率的高質(zhì)量mRNA,同時大幅減少具有免疫原性dsRNA的生成。因此,本制品適用于疫苗等RNA醫(yī)藥領(lǐng)域的研發(fā)。 |
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■ HQ級別品質(zhì) |
本產(chǎn)品的最終組成液中,不含人或動物源性成分以及β內(nèi)酰胺類化合物。 |
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■ 保存 |
-20℃。 |
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■ 起源 |
Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase variant |
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■ 性質(zhì) |
1. 分子量:約99.8 kDa
2. 輔因子:Mg2+
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■ 活性定義 |
在37℃,將1小時內(nèi)生成0.25μg 1.9kb FLuc RNA所需的酶量定義為1個活性單位(U)。 |
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■ 用途 |
1. 使用Cap類似物合成帶帽的mRNA(共轉(zhuǎn)錄加帽)
2. 用于酶法加帽的無帽RNA的合成
※ 與使用Cap類似物時相比,RNA產(chǎn)量減少5%~30%。
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■ 使用注意 |
1. 酶不要劇烈攪拌。
2. 當dsDNA模板、試劑、試管或微量移液器吸頭被RNase污染時,合成的RNA產(chǎn)量會降低或者出現(xiàn)片段化。在實驗過程中應(yīng)采取預防措施以避免RNase污染,例如戴一次性手套和使用專門用于 RNA實驗的試管和微量移液器吸頭。
3. 為了合成長度一致的RNA,通常使用線性dsDNA(例如線性化質(zhì)粒和PCR產(chǎn)物)用于體外轉(zhuǎn)錄。我們建議模板DNA末端應(yīng)為5’-突出或平端,以避免出現(xiàn)非特異性產(chǎn)物??筛鶕?jù)具體情況,使用BspQ I等限制酶使模板DNA線性化。
4. 緩沖液中的亞精胺會與核酸形成復合物并可能產(chǎn)生沉淀,因此模板DNA應(yīng)在加酶之前即倒數(shù)第二步再加入反應(yīng)體系中。
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