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機構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

均一化Mate & Plate文庫
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價格（元） 說明書 數(shù)量
Clontech 630479 Mate & Plate Library - HeLa S3 (Normalized) 5×1 ml ￥15,948
Clontech 630486 Mate & Plate Library - Human Brain (Normalized) 5×1 ml ￥15,948
Clontech 630487 Mate & Plate Library - Universal Arabidopsis (Normalized) 5×1 ml ￥15,948
Clontech 630485 Mate & Plate Library - Universal Drosophila (Normalized) 5×1 ml ￥15,948
Clontech 630480 Mate & Plate Library - Universal Human (Normalized) 5×1 ml ￥15,948
Clontech 630481 Mate & Plate Library - Universal Human (Normalized)(庫存銷售完畢即終賣) 2×1 ml ￥7,912
Clontech 630483 Mate & Plate Library - Universal Mouse (Normalized) 5×1 ml ￥15,948
 
 
    文庫構(gòu)建        
雙雜誘餌 → 酵母雙雜文庫構(gòu)建系統(tǒng) → 單缺培養(yǎng)基L  
    預(yù)制文庫        
    均一化預(yù)制文庫   YPDA培養(yǎng)基    
             
    Mate & Plate文庫 → → → 酵母雙雜篩選
            ↓
    寶生物文庫構(gòu)建服務(wù)       菌落PCR驗證
 
 
均一化的酵母雙雜交cDNA文庫——Normalized Mate & Plate
■ 制品說明
Normalized Mate and Plate Libraries是高度復(fù)雜的cDNA文庫，文庫克隆到GAL4 AD載體上并轉(zhuǎn)化到酵母菌株Y187中。因為文庫擴增和酵母轉(zhuǎn)化操作已經(jīng)完成，所以使用這些文庫進行雙雜交篩選更加省時省力。均一化處理降低了文庫中高豐度的轉(zhuǎn)錄本，低豐度及稀少的cDNA得以富集，這樣的文庫更加具有基因代表性，也使篩選操作更加簡單，并大大降低了在篩選文庫時獲得假陽性的可能性。
· 操作僅需三步：
1. 用Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid System構(gòu)建表達目的蛋白質(zhì)的酵母菌株。
2. 將bait菌株與1 ml均一化文庫混合過夜培養(yǎng)。
3. 鋪板于篩選培養(yǎng)基上。
· 什么是均一化文庫？
均一化處理降低了cDNA文庫中高豐度轉(zhuǎn)錄本所占的比例，這意味著許多管家基因的拷貝數(shù)顯著降低，所以篩選的克隆數(shù)更少，并且可以確保篩選到包含中等豐富和低等豐度轉(zhuǎn)錄本的克隆。簡而言之，您可以花費較少的精力篩選到更多的獨立克隆，并有更大的機會檢測到重要的互作。
· 如何制備均一化文庫？
首先用SMART技術(shù)擴增獲得cDNA，之后用雙鏈特異性核酸酶（DSN）進行均一化處理（1,2）。簡單來說，cDNA經(jīng)變性及退火后，用特異切割雙鏈DNA的酶快速酶切，因為cDNAs豐度越高退火越快，越有可能被酶降解。最后，用Northern blot方法分析cDNA均一化效率，將均一化的cDNA文庫克隆到prey載體pGADT7-RecAB上。
· 通用型文庫提供通用型基因覆蓋范圍
人和小鼠通用型文庫提供了廣泛且完善的表達基因覆蓋范圍。這些均一化通用型文庫來自于不同的齊全組織，這些特異挑選的組織能夠代表廣闊范圍內(nèi)表達的基因（2）。結(jié)合“全面的”基因代表性及低拷貝cDNAs的富集度，Mate & Plate Universal (Normalized) Libraries為鑒定新的真實的互作提供了更大的可能。
· 為什么使用均一化通用型文庫?
事實上，許多有意義的互作發(fā)生在位置適宜但表達較弱的蛋白質(zhì)之間，這類互作用傳統(tǒng)的單一組織文庫不容易檢測到。通用型且均一化的文庫為這個問題提供了有效的解決方法，因為這些文庫代表了平衡的轉(zhuǎn)錄本，能夠更大范圍的覆蓋表達的基因。因此，篩選不再局限于僅能鑒定出單一組織中高水平表達的蛋白質(zhì)之間的互作。
 
■ 制品特點
1. 為蛋白質(zhì)互作中的文庫篩選提供簡便方法。
2. 篩選更少的克隆，檢測更多的互作。
3. 通用型文庫——更高的基因代表性。
4. 篩選不再大海撈針。
 
■ 制品用途
1. 酵母雙雜交文庫篩選。
 
■ 文獻
1. Zhulidov, P. A. et al. (2004) Nucleic Acids Res. 32(3):e37.
2. Shagin, D. A. et al. (2002) Genome Res. 12(12):1953-1942.
 
 
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頁面更新：2024-06-12 13:51:30