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Code No. |
產(chǎn)品名稱 |
631205 |
HAT™ Protein Expression & Purification System
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■ 產(chǎn)品介紹 |
HAT(組氨酸親和標簽)蛋白質(zhì)表達和純化系統(tǒng)為蛋白質(zhì)表達和純化提供了方便且有效的解決方案。
HAT載體編碼一種新的多聚組氨酸表位標簽,這種標簽可以使細菌中表達的蛋白質(zhì)在中性或生理pH、變性或非變性條件下進行純化。 |
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HAT系統(tǒng) |
HAT表位是天然存在的非相鄰組氨酸殘基序列,其總電荷比具有連續(xù)His殘基標簽的低。
HAT融合蛋白質(zhì)的溶解度更接近野生型蛋白質(zhì),同時對固定化金屬離子仍具有很強的親合力,使用HAT系統(tǒng)純化蛋白質(zhì)有兩個主要優(yōu)點:
● 蛋白質(zhì)是可溶的,因此它不會形成聚集體或包涵體
● 蛋白質(zhì)可以在溫和條件(例如中性pH或低咪唑濃度)下洗脫
使用TALON樹脂純化pHAT載體表達的蛋白質(zhì)是一種很好的選擇,搭配分批法、重力流法或者使用TALON superflow樹脂搭配中壓的FPLC純化。TALON樹脂的鈷離子對HAT以及其他的多聚組氨酸標簽蛋白質(zhì)有很強的親和力,對其他蛋白質(zhì)的親和性很低。TALON樹脂理想的選擇特異性降低了背景,洗滌的步驟較少并且為中性,因此能夠非常好的保持蛋白質(zhì)的完整性。 |
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pHAT載體 |
HAT系統(tǒng)包含3種pHAT載體——pHAT10/11/12,三者結構相同,只是多克隆位點處的閱讀框稍有不同。每個載體都有腸激酶(EK)切割位點,用來將純化的蛋白質(zhì)的HAT序列除去。 限制性酶切位點的存在是為了可以將HAT序列切除(帶或不帶EK位點),以便于克隆至其他載體。
單獨提供的pHAT20載體,具備pHAT10/11/12的所有優(yōu)點,并且提供額外的克隆位點,使用方便,更容易將您的cDNA框與HAT序列融合。
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產(chǎn)品特點 |
● 在中性pH下純化蛋白質(zhì)
● 在變性或非變性條件下使用
● 蛋白質(zhì)溶解度更高
● 用TALON IMAC樹脂可以得到優(yōu)化的純化產(chǎn)物
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應用 |
在細菌系統(tǒng)中更容易表達和純化蛋白質(zhì),并且蛋白質(zhì)溶解度更高。 |
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實驗例 |
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FPLC方法純化HAT標簽蛋白質(zhì)。使用組分為50 mM sodium phosphate,0.3 M NaCl,5 mM imidazole,pH7.0的buffer破碎E. coli細胞提取蛋白質(zhì)并純化,最終以150 mM imidazole進行洗脫。 |
圖A. 使用TALON Superflow柱對細胞裂解液進行純化
圖B. SDS-PAGE 分析
M: 分子量marker |
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6xHis、6xHN和HAT標簽的氨基酸序列 |
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