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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說明書 數(shù)量
Clontech 631401 BacPAK6 DNA (Bsu36 I digest) 5 Transfections ￥7,261
Clontech 631721 X-GLUC 100 mg ￥5,728
無標(biāo)題文檔
 
Code No. 產(chǎn)品名稱
631401   BacPAK6™ DNA (Bsu36 I digest)
631721   X-GLUC
 
產(chǎn)品介紹
    與細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)相比，在昆蟲細(xì)胞中產(chǎn)生的重組蛋白質(zhì)的翻譯后加工和折疊更類似于哺乳動(dòng)物過程，有功能的目的蛋白質(zhì)的產(chǎn)量通常要大得多。因此，為了生產(chǎn)大量的重組蛋白質(zhì)，許多研究者已經(jīng)轉(zhuǎn)向桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)。
 
BacPAK法
    BacPAK系統(tǒng)采用苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒（AcMNPV）在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)目標(biāo)蛋白質(zhì)。首先把目的基因插入到穿梭載體中，然后與線性化的BacPAK6病毒DNA共轉(zhuǎn)染至昆蟲宿主細(xì)胞。這個(gè)特殊設(shè)計(jì)的BacPAK6病毒DNA能夠迫使病毒和載體之間發(fā)生重組，實(shí)現(xiàn)高的重組效率。重組之后挑選并純化幾個(gè)噬菌斑，驗(yàn)證重組表型。新分離得到的重組病毒就可以擴(kuò)增并且感染昆蟲細(xì)胞產(chǎn)生大量的目的蛋白質(zhì)。
    如有需要，可以使用產(chǎn)品附帶的pBacPAK8-GUS作為共轉(zhuǎn)染步驟的陽性對(duì)照。該載體具有大腸桿菌β-葡糖醛酸糖苷酶（GUS），克隆在多角體蛋白質(zhì)啟動(dòng)子的下游。pBacPAK8-GUS與BacPAK6病毒DNA重組后能夠表達(dá)β-葡糖苷酸酶，該酶可催化底物X-GLUC顯現(xiàn)藍(lán)色。
 
產(chǎn)品特點(diǎn)
    ● 每L培養(yǎng)基表達(dá)的蛋白質(zhì)量最高可達(dá)500 mg
    ● 重組效率>90%
    ● 蛋白質(zhì)折疊正確
    ● 可以有效表達(dá)具有生物活性的蛋白質(zhì)
    ● 真核蛋白質(zhì)的翻譯后修飾
 
產(chǎn)品應(yīng)用
在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)重組蛋白質(zhì)
 
BacPAK6 Viral DNA 圖譜
 
操作流程示意圖
In-Fusion Ready BacPAK載體和桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)。將含有目的基因的PCR片段直接克隆到In-Fusion Ready BacPAK載體以構(gòu)建N末端或C末端蛋白質(zhì)的表達(dá)載體。將驗(yàn)證過的克隆與BacPAK6病毒DNA共轉(zhuǎn)染至昆蟲細(xì)胞中，通過AcMNPV序列二者進(jìn)行重組，被感染的昆蟲細(xì)胞就會(huì)隨著病毒的擴(kuò)增而產(chǎn)生重組蛋白質(zhì)，最后使用TALON技術(shù)對(duì)其進(jìn)行純化。
 
實(shí)驗(yàn)例1
使用表達(dá)水母綠色熒光蛋白質(zhì)（AcGFP1）的重組桿狀病毒載體感染昆蟲細(xì)胞。使用In-Fusion Ready BacPAK載體構(gòu)建重組桿狀病毒，用以表達(dá)帶有N末端標(biāo)簽的AcGFP1。被感染的Sf9細(xì)胞能夠表達(dá)高水平的AcGFP1并發(fā)出強(qiáng)烈的熒光，流式細(xì)胞術(shù)的檢測(cè)結(jié)果顯示，被感染細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度是未感染對(duì)照組的約440倍。
 
實(shí)驗(yàn)例2
使用BacPAK桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)重組病毒制備蛋白質(zhì)。通過共轉(zhuǎn)染載體和BacPAK6病毒DNA (Bsu36 I消化)產(chǎn)生重組病毒，然后在Sf21細(xì)胞中進(jìn)行擴(kuò)增。感染48 hr后裂解細(xì)胞進(jìn)行SDS PAGE檢測(cè)。
泳道1：未被感染的Sf21細(xì)胞
泳道2：野生型AcMNPV病毒感染的Sf21細(xì)胞
泳道3：未重組BacPAK6病毒感染的Sf21細(xì)胞
泳道4：BacPAK8-GUS重組病毒感染的Sf21細(xì)胞
泳道5：純化的CAT蛋白質(zhì)
泳道6：BacPAK8-CAT重組病毒感染的Sf21細(xì)胞
泳道M：分子量marker
 
產(chǎn)品詳情請(qǐng)點(diǎn)擊：
 
 

頁面更新：2019-11-11 14:55:28