| Capturem膜技術 Capturem™ Trypsin | ||||||
| 品牌 | Code No. | 產品名稱 | 包裝量 | 價格（元） | 說明書 | 數量 |
| Clontech | 635722 | Capturem Trypsin | 20 rxns | ￥3,060 |
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| ■ 產品簡介 |
| 蛋白質質譜分析前的樣品消化步驟，通常需要4個小時甚至過夜，如果使用Capturem™ Trypsin 或 Capturem™ Pepsin，可在室溫下快速，高效和完全的消化蛋白質，從而使蛋白質組學分析流程更加連貫。這兩款產品是一次性小型離心柱的形式，應用新型膜技術，膜上固定有胰蛋白酶（Trypsin）或胃蛋白酶（Pepsin），在短短幾分鐘內即可高效、完全地酶解蛋白質樣品，與傳統(tǒng)的溶液法過夜處理相比，時間更短、效率更高、重復性更好、胰蛋白酶自溶片段更少，避免發(fā)生過度消化。 |
| ■ 快速、簡單的操作流程 |
| Capturem™ Trypsin 和 Capturem™ Pepsin包含小型離心柱和活化buffer，操作流程簡單、快速，只需要加入200 μl活化buffer離心1 min，然后加入蛋白質樣品再離心1 min，即可洗脫獲得可用于下游分析的肽段。 |
| ■ 產品特點 |
| ·操作快速，2 min-3 min內即可酶解蛋白質樣品，無需過夜處理 ·比溶液法效率更高，酶解更徹底 ·樣品中自溶片段更少，蛋白質非特異性修飾幾率更低 ·可以使整個蛋白質組學分析流程更加連貫，實現(xiàn)更有效的肽和蛋白質的質譜鑒定 |
| ■ 應用 |
| ·蛋白質鑒定 ·蛋白質組學分析 ·質譜樣品制備 ·抗體鑒定 |
| ■ 實驗例 |
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| 使用Capturem™ Trypsin對BT474全細胞裂解液進行酶解消化并做蛋白質組學分析。通過RP-HPLC將裂解液分成19個獨立的組分（圖A），然后再使用Capturem Trypsin對每個組分單獨酶解，并使用LC/MS-MS分析，每個組分中帶有2個或以上的特異性肽段的蛋白質總數被鑒定并繪制出，如B圖所示。 |
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| 使用Capturem™ Trypsin可以實現(xiàn)快速完全的Apomyoglobin（Apo）酶解。上圖為使用RP-HPLC分析Capturem Trypsin和常規(guī)溶液法酶解蛋白質的結果，圖A為未酶解的完整蛋白質，圖B為溶液法室溫酶解16 h的蛋白質，圖C為使用Capturem Trypsin酶解1 min的蛋白質，結果顯示使用Capturem Trypsin酶解的非常徹底。 |
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| 使用Capturem™ Trypsin可以酶解緊密折疊的蛋白質Myoglobin (Myo)。使用RP-HPLC對Capturem Trypsin和常規(guī)溶液法酶解的產物進行分析，圖A為未酶解的完整蛋白質，圖B為溶液法室溫酶解16 h的蛋白質，圖C為使用Capturem Trypsin酶解1 min的蛋白質，結果顯示使用Capturem Trypsin可以快速有效地酶解緊密折疊的蛋白質。 |
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| Capturem™ Pepsin的操作流程。在酶消化之前，抗體樣品被變性和還原。使用附帶的活化buffer初次活化柱子后，將還原處理后的抗體樣品溶液（50-800 μl）加入離心柱中，離心1分鐘。 在這個過程中，柱上發(fā)生胃蛋白酶消化，隨后再一次離心洗脫即可獲得肽片段，加入NaOH中和洗脫的肽片段，即可用于下游分析。 |
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| 使用Capturem™ Pepsin消化不同的小鼠抗體同種型。小鼠的IgG1, IgG2a, IgG2b, 和 IgG3各取 100 μg，使用TCEP和醋酸于75℃處理15 min進行變性操作，然后用5%甲酸buffer稀釋。使用Capturem™ Pepsin對稀釋的樣品進行消化，通過SDS-PAGE對消化和未消化的樣品（各取4 μg）進行檢測，如上圖所示。 |
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| 不同批次的Capturem™ Pepsin消化產物HPLC圖譜比較。使用5%的甲酸稀釋50 μg的Apo，選擇3個不同批次的Capturem™ Pepsin對其進行消化，HPLC結果顯示三組消化產物具有相同的片段，說明Capturem™ Pepsin具有良好的重復性。 |
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| Capturem™ Pepsin與pepsin溶液法消化結果比較。對50 μg 的anti-HER2單克隆抗體使用3種方法進行消化，分別是Capturem™ Pepsin，pepsin溶液法孵育4小時，pepsin溶液法孵育過夜。然后進行質譜分析。由上圖可以看出，使用溶液法的消化產物峰左移并且總體峰的數量較多，說明產生了過度消化，而使用Capturem™ Pepsin則沒有這個問題。 |
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頁面更新：2024-02-29 09:44:22
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