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產品選擇指南

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鎳離子快速純化柱—Capturem™ 膜技術
品牌 Code No. 產品名稱 包裝量 價格（元） 說明書 數(shù)量
Clontech 635710 Capturem™ His-Tagged Purification Miniprep Kit 20 Purifications ￥2,693
Clontech 635713 Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Kit 6 Purifications ￥3,509
Clontech 635715 Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns 25 Columns ￥7,794
Clontech 635719 Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns 50 Columns ￥14,029
Clontech 635714 Capturem™ His-Tagged Purification 96 96 well ￥5,017
Clontech 635724 Capturem™ His-Tag Large Volume 4 Purifications ￥5,841
Clontech 635730 Capturem™ His-Tagged Purification 24-Well Plate 24 well ￥5,222
 
■ 產品簡介
Capturem™ His-Tagged Purification Kit是以鎳離子為配基，結合Capturem™ 新型膜技術開發(fā)的用于His標簽蛋白質快速分離純化的產品。與傳統(tǒng)的固定化金屬離子樹脂相比，Capturem™ 系列產品以高性能的尼龍膜為介質并對其進行改造，增加了膜孔表面積，對His標簽蛋白質的結合能力≥75 mg/cm3。產品最突出的特點是柱床體積小，可在室溫下操作，純化簡單快速，比傳統(tǒng)樹脂的應用范圍更加靈活廣泛。有小量（miniprep）、中量（maxiprep）、大量（large volume）以及高通量（24 well和96 well）五種規(guī)格可供選擇。
 
■ 產品特點
· 室溫下操作，可應用于哺乳動物細胞和細菌樣品
· 操作簡單快速，蛋白質小量純化5 min即可完成，大量純化也僅需15-30 min
· 操作時間短，有利于蛋白質樣品保持活性
· 柱床體積小、帶入污染少，與傳統(tǒng)的鎳離子樹脂相比，產物純度更高
· 一次性使用純化柱，避免樣品之間交叉污染
· 除了部分產品中提供的xTractor Buffer以外，還兼容其他的裂解buffer，通用性強
· 兼容多種添加劑（如β-ME、EDTA、DTT、甘油、TCEP等），可在變性或非變性條件下進行純化
 
■ Capturem™ 膜原理
 
 
■ 產品主要參數(shù)
 
*收量多少取決于樣品的類型、物種以及抗體同種型（isotype）。
 
 
上圖A圖紅色方框部分為Capturem His-Tagged Purification Large Volume Units（白底的瓶頂裝置），B圖紅色方框部分為濾瓶螺紋接頭 (可用于33-45 mm直徑的瓶口)。圖A為純化裝置直接與直徑為33 mm的螺紋濾瓶直接連接。圖C為純化裝置通過螺紋接頭連接了45 mm的濾瓶。圖D為純化裝置與50 ml的tube直接連接。
 
 
上圖為使用Capturem™ His-Tagged Purification Large Volume Unit從細菌裂解液中純化過表達的6×His-GFPuv的演示示例。圖A.將純化裝置與直徑為33 mm的螺紋濾瓶直接連接。圖B.將含有目的蛋白質的澄清裂解液上樣。圖C.膜在上樣和洗滌操作后結合了目的蛋白質，因此呈現(xiàn)出綠色熒光蛋白（GFP）特征性的黃綠色，在洗脫操作之后恢復為初始的白色。圖D.目的蛋白質6×His-GFPuv被洗脫進50 ml的收集tube中。
 
■ 操作流程
 
 
■ 實驗例
實驗例1
 
Capturem純化柱對不同濃度的多種類添加試劑有良好的兼容性。上圖為使用miniprep kit對不同種類不同濃度添加劑的檢測結果，操作按照產品說明書進行。每項實驗的樣品、平衡液、洗滌液及洗脫液中均有所要檢測的添加試劑，樣品最終進行兩次300 μl的洗脫操作。
 
兼容試劑一覽表
 
Reagent Compatibility*
  MOPS 200 mM
  HEPES 200 mM
  Tris 200 mM
  EDTA 10 mM
  Beta-mercaptoethanol 30 mM
  DTT 10 mM
  TCEP 5 mM
  Guanidine-HCl 6 M
  Urea 8 M
  Nonionic detergent (Triton X-100) 2%
  Nonionic detergent (Tween 20) 2%
  Anionic detergent (SDS) 1%
  Arginine 500 mM
  Glycine 100 mM
  Histidine 20 mM
  Sodium chloride 2 M
  Imidazole 40 mM
  Glycerol 10%
 
* 表中數(shù)據(jù)為本產品經測試能夠兼容的試劑的最高濃度。
 
實驗例2
 
Capturem純化柱在變性條件下純化效果良好。使用miniprep kit按照產品說明書進行操作。根據(jù)變性和非變性條件添加適當?shù)腷uffer，每個純化柱上樣均為800 μl表達6×his-GFPuv的細胞裂解上清液，樣品中按需要添加8 M尿素或6 M鹽酸胍。
 
實驗例3
 
Capturem純化柱純化哺乳動物細胞表達的6×His標簽蛋白質。圖A和B，將編碼6×his-tagged MAPK1或 6×his-tagged ADRB2的質粒轉染293T細胞進行培養(yǎng)。細胞裂解后取澄清的上清液上樣，然后用400 μl wash buffer洗滌，再使用300 μl elution buffer洗脫。將各步驟組分通過4-20%的聚丙烯凝膠電泳檢測，并做硝酸纖維素膜印記檢測。圖A左圖，麗春紅染色顯示不同組分中的所有蛋白質。圖A右圖，用MAPK1特異性抗體做免疫印跡實驗可檢測到對應條帶。圖B左圖，麗春紅染色顯示不同組分中的所有蛋白質。圖B右圖，用ADRB2特異性抗體做免疫印跡實驗可檢測到產物中富集的ADRB2。圖C，使用編碼DsRed-Express2和6×his-tagged Metridia luciferase的雙順反子質粒轉染293T細胞，在10 cm的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。取細胞培養(yǎng)上清液用maxiprep柱純化，6 ml wash buffer洗滌，1 ml elution buffer洗脫。所有離心操作的參數(shù)為2,000×g離心5 min，最后通過Ready-to-Glow™ 對各組分中的熒光素酶的活性進行分析。
 
■ 各種試劑盒組成
· Capturem™ His-Tagged Purification Miniprep Kit （635710）
Capturem His-Tagged Purification Miniprep Column 20 個
xTractor Buffer 15 ml × 2
Wash Buffer 10 ml
Elution Buffer 10 ml
 
· Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Kit （635713）
Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column 6 個
Capturem Maxiprep Filters 6 個
xTractor Buffer 200 ml
Wash Buffer 40 ml
Elution Buffer 15 ml
 
· Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns（635715）*
Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column 25 個
 
· Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns（635719）*
Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column 50 個
 
· Capturem™ His-Tagged Purification 96（635714）*
Capturem His-Tagged Purification 96-Well Plate 1 塊
 
· Capturem™ His-Tagged Purification Large Volume（635724）*
Capturem His-Tagged Purification Large Volume Unit 4 個（每個盒子中2個）
Bottle Thread Adaptor 1 個
 
· Capturem™ His-Tagged Purification 24-Well Plate（635730）*
Capturem His-Tagged Purification 24-Well Plate 1 塊
 
*注：Capturem™ His-Tagged Purification 24-well、96-well、Maxiprep Columns以及Large Volume中不含buffer，請使用以下組分的buffer：
 
 
 
緩沖液 組成
Lysis Buffer   推薦使用xTractor Buffer（Code No. 635625），
  也可使用其他標準的裂解buffer
Wash Buffer   150 mM NaCl,20 mM Na3PO4,pH7.6
Elution Buffer   500 mM NaCl,20 mM Na3PO4,500 mM imidazole, pH7.6
 
參考文獻
[1] Stephanie S. Pavlovich, Sean P. Lovett,Galina Koroleva, et al. The Egyptian Rousette Genome Reveals Unexpected Features of Bat Antiviral Immunity[J]. Cell, 2018, 173(5):1098–1100.
[2] Sandra Luz Martínez-Hernández, Daniel Cervantes-García, Martín Munoz-Ortega, et al. An anti-amoebic vaccine: generation of the recombinant antigen LC3 from Entamoeba histolytica linked to mutated exotoxin A (PEDIII) via the Pichia pastoris system[J]. Biotechnology Letters, 2017, 39 (8):1149-1157.
[3] Min Kong, Fengjuan Wang, Liuying Tian, et al. Functional identification of glutamate cysteine ligase and glutathione synthetase in the marine yeast Rhodosporidium diobovatum[J]. Science of Nature, 2018, 105 (1-2):4.
[4] Ariana Kariminejada, Mohammadreza Barzgarb, Bita Bozorgmehra, et al. Novel mutations and a severe neurological phenotype in Sjogren-Larsson syndrome patients from Iran[J]. European Journal of Medical Genetics, 2018, 61 (3):139.
[5] Naho Mugita, Takayuki Nambu, Kazuya Takahashi, et al. Proteases, actinidin, papain and trypsin reduce oral biofilm on the tongue in elderly subjects and in vitro[J]. Archives of Oral Biology, 2017, 82:233-240.
[6] Xiao-Xiao Cheng, Li-Hong Zhao, Steven J.Klosterman, et al. The endochitinase VDECH from Verticillium dahliae inhibits spore germination and activates plant defense responses[J]. Plant Science, 2017, 259:12.
 
 
實驗操作視頻：
https://www.takarabio.com/learning-centers/protein-research/his-tag-purification/protocols/video-capturem-his-miniprep
 
 
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頁面更新：2020-03-20 11:07:38

使用文獻