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產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

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protein A原理的抗體快速純化柱—Capturem™ 膜技術(shù)
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價格（元） 說明書 數(shù)量
Clontech 635731 Capturem™ Protein A 24-Well Plate 1 × 24-well plate ￥5,932
Clontech 635746 Capturem™ Protein A Buffer 100 ml ￥1,002
無標(biāo)題文檔
 
■ 產(chǎn)品簡介
Capturem™ Protein A 系列產(chǎn)品是基于Protein A* 原理，結(jié)合新型膜技術(shù)的一次性抗體純化柱，特別適用于單克隆抗體和多克隆抗體的小量快速純化和篩選。室溫下操作即可，小量純化僅需5 min，因此無須擔(dān)心抗體的降解或失活。Capturem™ 系列產(chǎn)品以高性能的尼龍膜為介質(zhì)并對其進(jìn)行改造，增加了膜孔表面積，對抗體的結(jié)合能力≥75 mg/cm3。產(chǎn)品最突出的特點(diǎn)是柱床體積小，可在室溫下操作，純化簡單快速，可實(shí)現(xiàn)抗體的高濃度、高純度純化。
*Protein A是金黃色葡萄球菌的表面蛋白質(zhì)，對許多物種（如人、大小鼠）的IgG型抗體的Fc片段有很強(qiáng)的親和力。ProteinA與抗體的結(jié)合能力根據(jù)抗體同種型（isotype）的不同而不同。
 
■ 產(chǎn)品特點(diǎn)
· 快速方便：從上樣到洗脫，室溫下操作小量純化僅需5 min，無需孵育
· 一次性使用：有效減少樣品間的交叉污染，受protein A性質(zhì)影響，純化抗體的產(chǎn)量因物種
   和抗體同種型的不同而有所差別
· 高質(zhì)量：樣品停留時間短，從而有效地防止了抗體降解及失活，保障了下游應(yīng)用的成功率
· 高純度、高濃度：柱床體積小，帶入污染少，可實(shí)現(xiàn)大體積洗滌，小體積洗脫
· 高靈活性：可從廣泛來源的樣品中純化抗體，如動物血清、腹水、細(xì)胞培養(yǎng)基等
注：Capturem™ Protein A 24-Well Plate-HC（Code No. 635743）經(jīng)過優(yōu)化，與舊版本產(chǎn)品（Code No. 635731）相比，收量更高。
 
■ Capturem™ 膜原理
 
■ 產(chǎn)品主要參數(shù)
 
* 注：Maxiprep需要50 ml tube使用的離心機(jī)，24 well、96 well 需要24孔板、96孔板適用的離心機(jī)或真空過濾裝置。(以下產(chǎn)品：Capturem Protein A Maxiprep、Capturem Protein A Miniprep、Capturem Protein A 96-well Plate已停止售賣)
 
Capturem Protein A Miniprep與不同物種來源的抗體的結(jié)合能力
 
物種 親和力 (μg/column)*
Goat 100-150
Horse >150
Human >150
Mouse 100-150
Rabbit 50-100
Rat >150
Sheep >150
 
*使用磷酸鹽結(jié)合緩沖液(pH8.0)對不同物種來源的總血清進(jìn)行稀釋然后經(jīng)Capturem Protein A Miniprep 純化，產(chǎn)物的量通過測定其在280 nm處的吸光度進(jìn)行計算。
 
■ Protein A和Protein G對于不同來源和亞型抗體的親和性
Species

Antibody subtype

 Protein A Protein G Protein A/G
Human Total lgG +++ +++ +++
lgG1 +++ +++ +++
lgG2 +++ +++ +++
lgG3 + +++ +++
lgG4 +++ +++ +++
lgM + - +
lgD - - -
lgA1 + - +
lgA2 + - +
Fab + + +
scFv + - +
Mouse Total lgG +++ +++ +++
lgM - - -
lgG1 + ++ ++
lgG2a +++ +++ +++
lgG2b +++ +++ +++
lgG3 +++ +++ +++
Rat Total lgG + ++ ++
lgG1 + ++ ++
lgG2a - +++ +++
lgG2b - + +
lgG2c +++ +++ +++
Rabbit Total lgG +++ +++ +++
+++ strong binding
++ medium binding
+ weak binding
- no binding
 
■ 操作流程
 
■ 產(chǎn)品性能
 
■ 實(shí)驗(yàn)例
從雜交瘤培養(yǎng)上清液中篩選Cas9的單克隆抗體。所有克隆均是小鼠IgG1同種型，所以使用高鹽法進(jìn)行純化。選擇Capturem™ Protein A Maxiprep，使用6 ml buffer (配方10 mM sodium borate, pH 8.9, 3 M NaCl)進(jìn)行平衡，2,000 x g 離心3 min。向抗體上清原液中加入1/10體積的1 M sodium borate（pH8.9）將NaCl濃度調(diào)節(jié)至3.3 M。取20 ml上清液上樣，2,000 x g 離心3 min，流出液重復(fù)上樣一次，盡可能多的結(jié)合抗體。然后使用10 ml wash buffer（配方3 M NaCl, 10 mM sodium borate, pH8.9）洗滌，最后用0.5 ml的elution buffer(配方100 mM glycine, pH3.0)洗脫，收集管中需預(yù)先添加有50 μl 的中性buffer（配方1 M tris, pH8.5），使用少量elution buffer洗脫以便獲得高濃度抗體產(chǎn)物。圖A，SDS-PAGE 凝膠電泳檢測純化產(chǎn)物。圖B，將Cas9表達(dá)量低(lane #1)和高(lane #2)的細(xì)胞裂解液分別進(jìn)行凝膠電泳并轉(zhuǎn)膜，再使用Capturem™ Protein A Maxiprep純化得到的抗體對其進(jìn)行免疫印跡反應(yīng)。圖C，使用篩選到的抗體，對不同比例稀釋(從左至右: 20 ng, 10 ng, 5 ng, 2.5 ng, 1.25 ng, 0.625 ng)的Cas9 蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫印跡反應(yīng)
 
 
實(shí)驗(yàn)操作視頻：
https://www.takarabio.com/learning-centers/protein-research/his-tag-purification/protocols/video-capturem-his-miniprep
 
 
 

頁面更新：2023-04-23 10:45:28