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Code No. |
產(chǎn)品名稱 |
635641 |
TALON® PMAC Magnetic Phospho Enrichment Kit |
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■ 產(chǎn)品描述 |
本產(chǎn)品結(jié)合了TALON-磷酸化蛋白質(zhì)富集試劑盒的磷酸特異性和磁珠分離法的便利性,與磁力架搭配使用,可為從哺乳動物細胞和組織中提取mg量的磷酸化蛋白質(zhì)提供了簡單快速的基于金屬親和的方法。 |
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分離胞質(zhì)蛋白質(zhì)和膜結(jié)合蛋白質(zhì) |
試劑盒中包含磷酸化蛋白質(zhì)富集磁珠和一整套的buffer,能夠?qū)辛姿峄被醾?cè)鏈(包括絲氨酸,酪氨酸或蘇氨酸)的所有類型磷酸化蛋白質(zhì)(包括細胞質(zhì)蛋白質(zhì)和膜結(jié)合蛋白質(zhì))進行組特異性富集。 |
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提取/上樣buffer中含有非離子型去污劑用于提取胞內(nèi)蛋白質(zhì),洗滌buffer和洗脫buffer不含去污劑。如果需要,可以使用pH9.0的buffer洗脫磷酸化蛋白質(zhì),這對有些類型的下游應(yīng)用更加合適。。 |
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小體積洗脫液的微量蛋白質(zhì)純化 |
試劑盒中的磁珠是以5%懸液的形式提供的,已經(jīng)證實每ml懸液可結(jié)合400 μg的α-酪蛋白。磁珠的用量需要根據(jù)起始樣品的濃度進行調(diào)節(jié),富集的磷酸化蛋白質(zhì)可以通過小體積的洗脫液(50-200 μg)洗脫,以便獲得較高濃度的產(chǎn)物。 |
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對磷酸化蛋白質(zhì)的高選擇性 |
在細胞的所有蛋白質(zhì)中,只有少部分蛋白質(zhì)會被磷酸化,因此在進行研究之前對磷酸化蛋白質(zhì)進行富集是非常有必要的。TALON® PMAC Magnetic Phospho Enrichment Kit可用于任何種類的哺乳動物或組織樣品,實際得到的磷酸化蛋白質(zhì)的產(chǎn)量根據(jù)細胞系的不同而不同。 |
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■ 產(chǎn)品特點 |
· 用于微量磷酸化蛋白質(zhì)純化的金屬親和方法,操作簡單
· 可以從任意種類的細胞或組織樣品中簡便快速的進行富集操作
· 非變性的實驗條件維持了蛋白質(zhì)的構(gòu)象和溶解性
· 洗脫得到的產(chǎn)物是小體積應(yīng)用的理想選擇 |
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■ 應(yīng)用 |
提取和富集所有種類的磷酸化蛋白質(zhì) |
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■ 實驗例 |
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使用TALON PMAC Magnetic Phospho Enrichment Kit可以高效富集磷酸化蛋白質(zhì)。使用含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑(10 mM氟化鈉)的提取/上樣buffer從HEK 293細胞中提取蛋白質(zhì),然后與200 μl的磁珠混懸液室溫混合30 min,洗滌、洗脫。將各組分電泳并使用對應(yīng)的磷酸化蛋白質(zhì)特異性抗體(圖A是AKT (Ser 473),圖B是P-AKT (Thr 308) ,圖C是P-PTEN (Ser 380) ,圖D是P-GSK3 beta (Ser 9))做Western Blotting檢測,Lane1是提取產(chǎn)物,Lane2是流穿液,Lane3是洗脫液。圖D的51 kDa條帶是由于抗體與P-GSK3a交叉反應(yīng)的結(jié)果。 |
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