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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

高滴度慢病毒包裝系統(tǒng)
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說(shuō)明書 數(shù)量
Clontech 631275 Lenti-X™ Packaging Single Shots (VSV-G) 16 Rxns ￥12,287
Clontech 631276 Lenti-X™ Packaging Single Shots (VSV-G) 96 Rxns ￥27,980
Clontech 631277 Lenti-X™ Packaging Single Shots (Integrase Deficient) 16 Rxns ￥11,672
Clontech 631278 Lenti-X™ Packaging Single Shots (Ecotropic) 16 Rxns ￥11,672
Clontech 631282 Lenti-X™ Packaging Single Shots (96-well, VSV-G) 4 × 96-well plates ￥13,055
Clontech 631294 Lenti-X™ Packaging Single Shots (Envelope-Free) 16 Rxns ￥11,323
無(wú)標(biāo)題文檔
 
 
慢病毒包裝系統(tǒng) → 293T包裝細(xì)胞 → 慢病毒滴度測(cè)定 → 慢病毒濃縮 → 慢病毒純化 → 轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng) → 整合位點(diǎn)檢測(cè)
 
 
高滴度慢病毒包裝系統(tǒng)
Lenti-X Packaging Single Shots是第四代慢病毒包裝系統(tǒng)，它通過(guò)非常簡(jiǎn)便、操作一致的一步法來(lái)制備高滴度慢病毒。通常情況下，VSV-G型慢病毒滴度可達(dá)到107-108 IFU/ml。Lenti-X Packaging Single Shots由單管形式的Xfect Transfection Reagent和經(jīng)過(guò)配比優(yōu)化的Lenti-X包裝質(zhì)粒組成，兩者預(yù)混后經(jīng)過(guò)預(yù)分裝和凍干處理，所以無(wú)需額外的轉(zhuǎn)染試劑。只需要將這種混合物與您選擇的慢病毒載體在無(wú)菌水中重新配制，然后將其添加到10厘米培養(yǎng)皿或者96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)的293T細(xì)胞中，例如Lenti-X 293T Cells（Code No. 632180）即可制備高滴度病毒。
 
我們提供以下四種類型的Lenti-X Packaging Single Shots，這些包裝系統(tǒng)針對(duì)不同的嗜性和整合特征進(jìn)行了優(yōu)化。每管中試劑和載體的量，都是以在10厘米培養(yǎng)皿或者96孔培養(yǎng)板中制備慢病毒來(lái)進(jìn)行優(yōu)化的。轉(zhuǎn)染過(guò)程完全可以在血清存在的情況下進(jìn)行，使用不含四環(huán)素的FBS，對(duì)于使用該技術(shù)獲得高病毒滴度是很關(guān)鍵的。

· Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)和Lenti-X Packaging Single Shots (96-well, VSV-G) 在四種類型系統(tǒng)中提供最高的病毒滴度（107-108 IFU/ml），具有最廣泛的病毒嗜性，分別以單管和96孔的形式提供。
· Lenti-X Packaging Single Shots (Ecotropic)病毒嗜性限于小鼠和大鼠來(lái)源細(xì)胞
· Lenti-X Packaging Single Shots (Integrase Deficient)制備整合能力顯著降低的VSV-G假型慢病毒
· Lenti-X Packaging Single Shots (Envelope-Free) 可靈活制備帶有所選包膜蛋白的假型慢病毒。

 
■ 應(yīng)用
· 慢病毒可以轉(zhuǎn)導(dǎo)廣泛的難轉(zhuǎn)染細(xì)胞類型
· 輕松構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系
· 制備VSV-G假型，單嗜型或整合酶缺陷型慢病毒
 
■ 觀看視頻
了解我們的第四代包裝系統(tǒng)如何可以產(chǎn)生如此高的病毒滴度。
 
了解使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 如何輕松始終如一地獲得高滴度慢病毒。
 

■ 實(shí)驗(yàn)例
 
圖1. Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 操作流程。
 
圖2. Lenti-X Packaging Single Shots (Envelope-Free)操作流程。
 
圖3. 高效一致的轉(zhuǎn)染可制備出高滴度病毒。在四個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)中，按照Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 操作流程包裝含有ZsGreen1基因的慢病毒載體。簡(jiǎn)而言之，在四個(gè)Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 中，每一個(gè)都添加7 μg pLVX-ZsGreen1質(zhì)粒；每管渦旋振蕩20秒并在室溫下孵育10分鐘。然后，將混合物添加至匯合度約為80％的培養(yǎng)Lenti-X 293T cells中。轉(zhuǎn)染后48小時(shí)，通過(guò)熒光顯微鏡（Panel A，頂部）和光學(xué)顯微鏡（Panel A，底部）拍攝圖像。拍攝圖像后，收集培養(yǎng)上清液，感染HT1080細(xì)胞并進(jìn)行滴度測(cè)定（Panel B，IFU/ml）。
 
圖4. 無(wú)論是哪種慢病毒載體骨架，使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 都可以制備出高滴度病毒。將CMV ZsGreen1表達(dá)框克隆到多個(gè)慢病毒載體骨架中，然后按照操作指導(dǎo)使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 將這些載體包裝成為慢病毒。在四個(gè)Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 中，每一個(gè)都添加7 μg pLVX-ZsGreen1質(zhì)粒；每管渦旋振蕩20秒并在室溫下孵育10分鐘。然后，將混合物添加至匯合度約為80％的培養(yǎng)Lenti-X 293T cells中。轉(zhuǎn)染后48小時(shí)，通過(guò)多種方法測(cè)定病毒滴度。為了確定感染性，收集上清液并感染HT1080細(xì)胞（流式細(xì)胞術(shù)）。收集的病毒上清液也通過(guò)RT-PCR方法定量病毒基因組拷貝數(shù)（qRT-PCR，Lenti-X qRT-PCR Titration Kit），ELISA方法測(cè)定p24（p24 ELISA，Lenti-X p24 Rapid Titer Kit），或者通過(guò)一種快速檢測(cè)方法（Lenti-X GoStix）測(cè)定滴度。
 
圖5. 第四代和第三代慢病毒包裝系統(tǒng)比較。我們的Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 使用的是5個(gè)獨(dú)立組件組成的包裝系統(tǒng)(Panel A)，這5個(gè)組件按照特別比例混合，優(yōu)化了病毒包裝性能。gag，pol和env基因的分離有效地降低了RCL產(chǎn)生的概率（Wu et al., 2000）。Tet-Off和Tat反式激活因子驅(qū)動(dòng)病毒必需成分高水平表達(dá)，誘導(dǎo)級(jí)聯(lián)表達(dá)反應(yīng)，從而可以制備出高滴度慢病毒。pol基因與vpr 基因的融合可以確保反轉(zhuǎn)錄酶/整合酶蛋白質(zhì)能夠轉(zhuǎn)運(yùn)到重組慢病毒顆粒中。本示意圖沒有顯示所有的載體元件。而第三代慢病毒包裝系統(tǒng)（Panel B）不包含分離的gag和pol序列，也沒有使用反式激活級(jí)聯(lián)機(jī)制，所以產(chǎn)生的病毒滴度較低。
 
 
 
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頁(yè)面更新：2024-05-13 14:45:05

使用文獻(xiàn)