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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

慢病毒整合位點(diǎn)識(shí)別
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說明書 數(shù)量
Clontech 631263 Lenti-X Integration Site Analysis Kit Each ￥12,110
無標(biāo)題文檔
 
 
慢病毒包裝系統(tǒng) → 293T包裝細(xì)胞 → 慢病毒滴度測定 → 慢病毒濃縮 → 慢病毒純化 → 轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng) → 整合位點(diǎn)檢測
 
 
 
慢病毒整合位點(diǎn)識(shí)別
使用Lenti-X Integration Site Analysis Kit檢測重組慢病毒載體整合的確切位點(diǎn)。慢病毒的復(fù)制生命周期會(huì)將慢病毒RNA基因組的一個(gè)DNA拷貝整合到宿主基因組中。所選擇的整合位點(diǎn)對(duì)轉(zhuǎn)基因的表達(dá)和宿主細(xì)胞的表現(xiàn)型都有重要影響。Lenti-X Integration Site Analysis Kit使用基因組步移技術(shù)來識(shí)別這些整合位點(diǎn)，以便對(duì)其進(jìn)行測序和分析。
 
基因組步移技術(shù)主要包含以下步驟：
1. 從轉(zhuǎn)導(dǎo)后細(xì)胞克隆或細(xì)胞群提取基因組DNA，使用平末端切割限制酶進(jìn)行消化。
2. 將基因組步移接頭連接到基因組DNA文庫的平末端。
3. 通過一輪PCR從文庫中擴(kuò)增出同時(shí)包含文庫接頭和慢病毒序列的片段。
4. 第二輪巢式PCR通常會(huì)產(chǎn)生一個(gè)單一的主要PCR產(chǎn)物，可對(duì)其進(jìn)行測序以確定整合位點(diǎn)。多個(gè)整合位點(diǎn)會(huì)產(chǎn)生多個(gè)條帶，可對(duì)每個(gè)條帶進(jìn)行純化和單獨(dú)測序。
 
圖1. Lenti-X Integration Site Analysis Kit操作流程圖。主要包括以下3大步驟：構(gòu)建三個(gè)病毒整合文庫，PCR擴(kuò)增文庫基因組DNA，分析PCR產(chǎn)物。凝膠結(jié)果展示了一個(gè)典型的分析結(jié)果。 Lane 1：HpaI文庫；Lane 2: DraI文庫；Lane 3: SspI文庫；Lane 4: 無模板對(duì)照；Lane M: DNA size markers；AP：接頭引物；LSP：慢病毒特異性引物。
 
 
 
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頁面更新：2024-05-13 14:53:51