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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

當(dāng)前位置：首頁(yè)> 產(chǎn)品選擇指南 > 基因?qū)耄╒irus、Vectors） > 重組慢病毒(Lentivirus)制品 > 慢病毒包裝系統(tǒng) SARS-CoV-2假病毒包裝系統(tǒng)
慢病毒包裝系統(tǒng) SARS-CoV-2假病毒包裝系統(tǒng)
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說明書 數(shù)量
Clontech 632668 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Full Length) 12 Rxns ￥13,301
Clontech 632669 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Full Length) 12 Rxns ￥13,301
Clontech 631292 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Full Length) 12 Rxns ￥13,529
Clontech 632670 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Truncated) 12 Rxns ￥13,301
Clontech 632671 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Truncated) 12 Rxns ￥13,301
Clontech 631293 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Truncated) 12 Rxns ￥13,529
Clontech 631295 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal) 16 Rxns ￥13,404
Clontech 632672 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length) 12 Rxns ￥10,686
Clontech 632673 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length) 12 Rxns ￥10,686
Clontech 631290 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length) 12 Rxns ￥10,916
Clontech 632674 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated) 12 Rxns ￥10,686
Clontech 632675 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated) 12 Rxns ￥10,686
Clontech 631291 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated) 12 Rxns ￥10,916
Clontech 632676 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) 6 Rxns ￥5,182
無標(biāo)題文檔
 
開發(fā)COVID-19療法的一個(gè)共同目標(biāo)就是要證明對(duì)SARS-CoV-2病毒的感染具有抑制作用。基于安全措施考慮，目前研究人員大多使用帶有SARS-CoV-2刺突蛋白（spike protein）的假病毒（Ni et al. 2020, Shang et al. 2020）替代SARS-CoV-2活病毒開展研究。我們對(duì)Lenti-X包裝系統(tǒng)進(jìn)行了優(yōu)化，這樣可以很方便地制備高滴度的spike-假慢病毒，為這些研究工作提供支持。
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots是一種假型慢病毒包裝系統(tǒng)，用于簡(jiǎn)便制備具有SARS-CoV-2刺突蛋白作為包膜蛋白的假型慢病毒，有兩種類型產(chǎn)品可供選擇。
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal)使您能夠輕松靈活地制備任何所需要的SARS-CoV-2刺突蛋白變體的高滴度假型慢病毒。只需將任意所需的SARS-CoV-2刺突蛋白變體序列克隆到所提供的表達(dá)載體中，用滅菌水稀釋所選擇的表達(dá)載體，然后將混合物添加到試劑盒中提供的單次反應(yīng)管中。然后，將重組后的轉(zhuǎn)染混合物添加至10 cm培養(yǎng)皿培養(yǎng)的包裝細(xì)胞中。為方便使用，我們提供分別編碼截短的SARS-CoV-2刺突蛋白變體D614G、B.1.1.7和B.1.351的三個(gè)質(zhì)粒。使用提供的刺突蛋白變體序列作為模板和pEmpty載體，通過簡(jiǎn)便的一步In-Fusion Snap Assembly反應(yīng)可以輕松構(gòu)建所需要的SARS-CoV-2刺突蛋白變體。
 
其它Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots試劑盒包括：含有Xfect轉(zhuǎn)染試劑和慢病毒包裝質(zhì)粒的凍干混合物，慢病毒包裝質(zhì)粒攜帶四種不同刺突蛋白變體中的其中一種；表達(dá)綠色熒光蛋白質(zhì)ZsGreen1和熒光素酶報(bào)告基因的轉(zhuǎn)移載體；制備缺少包膜蛋白慢病毒粒子的轉(zhuǎn)染混合物（通常用作陰性對(duì)照）。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots試劑盒，通過簡(jiǎn)便的一步法即可獲得高滴度SARS-CoV-2假病毒：只需將含有您選擇的轉(zhuǎn)移載體的水溶液添加至單管中，然后使用重組后的轉(zhuǎn)染混合物轉(zhuǎn)染培養(yǎng)在10厘米培養(yǎng)皿中的包裝細(xì)胞Lenti-X 293T Cell Line（Code No. 632180）。轉(zhuǎn)染后48–72小時(shí)收集病毒上清液。
 
有多種包裝系統(tǒng)可供選擇，可制備帶有6種不同SARS-CoV-2刺突蛋白變體的病毒粒子：

· WT Spike, Full Length—野生型（全長(zhǎng)），來源于新型冠狀病毒SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1分離株 (NC_045512.2) , 我們對(duì)密碼子進(jìn)行了優(yōu)化，可以在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)
· D614G Spike, Full length—D614G變異型（全長(zhǎng)），刺突蛋白編碼序列包含D614G突變; 自COVID-19爆發(fā)以來，這種變異型的流行性迅速上升 (Isabel et al. 2020)
· B.1.351 Spike，F(xiàn)ull Length—B.1.351變異型（全長(zhǎng)），最初在南非確定的變異株，WHO劃分為β型。
· WT Spike, Truncated—野生型（Truncated）
· D614G Spike，Truncated—D614G變異型（Truncated）
· B.1.351 Spike，Truncated—B.1.351變異型（Truncated）
截短的野生型和D614G、B.1.351變異型刺突蛋白編碼序列，去除了C-端19個(gè)氨基酸。這種截短處理，提高了所制備病毒粒子上刺突蛋白的豐度，提高了病毒粒子的感染性 (Johnson et al. 2020)。

為方便起見，Lenti-X SARS-CoV-2 packaging mixes也可以單獨(dú)購(gòu)買。
也可以提供需要配套使用的宿主細(xì)胞Human ACE2 293T Cell Line（Code No.631289）。
 
■ 概述
· 高性能包裝系統(tǒng)有助于始終獲得高病毒滴度：避免在試劑優(yōu)化上花費(fèi)時(shí)間，讓您可以專注于下游分析
· 便捷的單管形式可大大減少動(dòng)手時(shí)間和出錯(cuò)的可能性：操作簡(jiǎn)便，只需要將含有所選擇轉(zhuǎn)移質(zhì)粒的水溶液，添加至包裝細(xì)胞培養(yǎng)液中即可
· 包裝混合物可以單獨(dú)購(gòu)買，也可以打包購(gòu)買：節(jié)約資源，按需購(gòu)買
· 提供中和試驗(yàn)對(duì)照：可使用試劑盒中的包裝混合物，制備缺少包膜蛋白的慢病毒粒子，用作陰性對(duì)照
· 提供配套宿主細(xì)胞ACE2 cell line
 
 
■ 實(shí)驗(yàn)例
圖1. 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制備假病毒操作流程。
 
圖2. Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal)操作流程。
 
圖3. 使用SARS-CoV-2假病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)ACE2-陽性細(xì)胞。Panel A. 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制備表達(dá)WT (Wuhan-Hu-1) 或者D614G變體刺突蛋白，同時(shí)也表達(dá)ZsGreen1綠色熒光蛋白質(zhì)的假慢病毒粒子。每種病毒制劑取100 μl，轉(zhuǎn)導(dǎo)穩(wěn)定表達(dá)人ACE2受體的HEK293T細(xì)胞，HEK293T細(xì)胞培養(yǎng)在含有6 μg/ml polybrene 的48孔板中。轉(zhuǎn)導(dǎo)后6天通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定每個(gè)樣品的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。Panel B. 使用表達(dá)螢火蟲熒光素酶的假病毒分別轉(zhuǎn)導(dǎo)ACE2-陽性和不表達(dá)ACE2的HEK293T細(xì)胞（用于提供熒光素酶活性分析背景信號(hào)）。轉(zhuǎn)導(dǎo)后6天測(cè)定熒光素酶活性。
 
圖4. 測(cè)定使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots獲得的功能滴度。Panel A.使用SARS-CoV-2假病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)ACE2-陽性HEK293T細(xì)胞，通過分析ZsGreen1熒光標(biāo)記的表達(dá)情況測(cè)定功能滴度。Panel B. 感染后72小時(shí)，ACE2-陽性細(xì)胞的顯微圖像。
 
 
圖5. 可溶性ACE2蛋白對(duì)攜帶SARS-CoV-2刺突蛋白變體假病毒的中和活性。Panels A and B. 梯度稀釋融合IgG Fc結(jié)構(gòu)域的可溶性ACE2蛋白（ACE2-Fc），與SARS-CoV-2假病毒作用于ACE2 HEK293T細(xì)胞。感染后3天檢測(cè)熒光素酶表達(dá)水平，作為病毒感染性讀數(shù)。數(shù)據(jù)以相對(duì)于僅病毒對(duì)照感染的中和作用百分比表示。數(shù)值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。
 
圖6. 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制備D614G和B.1.351變異型SARS-CoV-2假病毒，測(cè)定其轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和感染滴度。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots（B.1.351或D614G，全長(zhǎng)或截短）制備表達(dá)ZsGreen1綠色熒光蛋白質(zhì)的SARS-CoV-2假病毒。按照標(biāo)準(zhǔn)操作指導(dǎo)，使用Lenti-X Concentrator將病毒液濃縮50倍（B.1.351全長(zhǎng)）或20倍（B.1.351截短和D614G），取不同體積病毒液轉(zhuǎn)導(dǎo)HEK293T細(xì)胞，此細(xì)胞在48孔板中培養(yǎng)，含有6 μg/ml聚凝胺，能穩(wěn)定表達(dá)人ACE2受體。在轉(zhuǎn)導(dǎo)后6天通過流式細(xì)胞儀測(cè)定每個(gè)樣品的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率（Panel A），并計(jì)算功能滴度（Panel B）。
 
圖7. 使用Lenti-X Packaging Single Shots (Universal)制備的SARS-CoV-2假病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)ACE2-陽性細(xì)胞。使用Lenti-X Packaging Single Shots (Universal)制備表達(dá)截短的B.1.1.7 SARS-CoV-2刺突蛋白，同時(shí)也表達(dá)ZsGreen1綠色熒光蛋白質(zhì)(Panel A)或者螢火蟲熒光素酶(Panel B)的假型慢病毒粒子。Panel A. 使用濃縮后的病毒上清液(20X; 30 or 10 μl)轉(zhuǎn)導(dǎo)穩(wěn)定表達(dá)人ACE2受體的HEK293T細(xì)胞，HEK293T細(xì)胞培養(yǎng)在48孔板中，polybrene含量為6 μg/ml。轉(zhuǎn)導(dǎo)后6天通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定每個(gè)樣品的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。Panel B. 使用濃縮后的病毒上清液(20X; 30, 20, or 10 μl)分別轉(zhuǎn)導(dǎo)穩(wěn)定表達(dá)人ACE2受體的HEK293T細(xì)胞，HEK293T細(xì)胞培養(yǎng)在48孔板中，polybrene含量為6 μg/ml。轉(zhuǎn)導(dǎo)缺少ACE2轉(zhuǎn)基因的HEK293T細(xì)胞，以測(cè)定背景發(fā)光水平（NC，陰性對(duì)照）。轉(zhuǎn)導(dǎo)后6天測(cè)定每個(gè)樣品的發(fā)光值。
 
圖8. 表達(dá)螢火蟲熒光素酶的B.1.351 SARS-CoV-2假病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)ACE2 HEK293T細(xì)胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 spike, 全長(zhǎng)或截短)制備表達(dá)螢火蟲熒光素酶的假病毒。按照標(biāo)準(zhǔn)操作指導(dǎo)，使用Lenti-X Concentrator將病毒液濃縮20倍，取不同體積病毒液轉(zhuǎn)導(dǎo)HEK293T細(xì)胞，此細(xì)胞在48孔板中培養(yǎng)，含有6 μg/ml聚凝胺，能穩(wěn)定表達(dá)人ACE2受體。同時(shí)平行轉(zhuǎn)導(dǎo)不表達(dá)ACE2受體的HEK293T細(xì)胞以確定背景發(fā)光水平，因?yàn)樵谌狈CE2受體的情況下，SARS-CoV-2假病毒無法感染HEK293T細(xì)胞。在轉(zhuǎn)導(dǎo)3天后測(cè)定每個(gè)樣品的發(fā)光值。
 
■ 制品內(nèi)容
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Full Length)（Code No. 632668）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length) （Code No. 632672）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix（No-Envelope Control) （Code No. 632676）
·Lenti-X Reporter Vector Set＊1＊2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Full Length)（Code No. 632669）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length) （Code No. 632673）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) （Code No. 632676）
·Lenti-X Reporter Vector Set＊1＊2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Full Length)（Code No. 631292）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length) (Code No. 631290)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set＊1＊2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Truncated)（Code No. 632670）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated) （Code No. 632674)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set＊1＊2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Truncated)（Code No. 632671）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated) （Code No. 632675)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set＊1＊2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Truncated)（Code No. 631293）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated) (Code No. 631291)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set＊1＊2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal)（Code No. 631295）＊3
·Lenti-X Packaging Single Shots (Envelope-Free)＊1
·pEmpty Vector＊1（500 ng/μl） 20 μl
·Lenti-X Reporter Vector Set＊1 *2
·Lenti-X SARS-CoV-2 Spike Vector Set＊1
  pSpike D614G Truncated Vector（500 ng/μl） 20 μl
  pSpike B.1.1.7 Truncated Vector（500 ng/μl） 20 μl
  pSpike B.1.351 Truncated Vector（500 ng/μl） 20 μl
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length) （Code No. 632672）
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length) （Code No. 632673）
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length) (Code No. 631290)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated) （Code No. 632674）
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated) （Code No. 632675）
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated) (Code No. 631291)
  各12管（冷凍干燥品）
  ※1管用于1個(gè)10 cm培養(yǎng)皿病毒包裝使用
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) （Code No. 632676）
  6管（冷凍干燥品）
  ※1管用于1個(gè)10 cm培養(yǎng)皿病毒包裝使用
 
＊1 不單獨(dú)銷售。
＊2 Lenti-X Reporter Vector Set
  pEmpty Vector＊1（500 ng/μl） 20 μl
  pLVXS-Luciferase-Puro Vector（500 ng/μl） 20 μl
  不單獨(dú)銷售。請(qǐng)使用大腸桿菌擴(kuò)增以獲得充足數(shù)量的質(zhì)粒。
＊3 我們還提供不包含Lenti-X SARS-CoV-2 Spike Vector Set的產(chǎn)品。在不需要Lenti-X SARS-CoV-2 Spike Vector Set的場(chǎng)合下，請(qǐng)選擇Lenti-X Packaging Single Shots (Envelope-Free)（Code No. 631294）。
 
■ 保存
－20℃
（各Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix保存在裝有干燥劑的箔袋內(nèi)）
 
參考文獻(xiàn)
1. Detection of SARS-CoV-2-Specific Humoral and Cellular Immunity in COVID-19 Convalescent Individuals. Ni, L. et al. Immunity. (2020) 52, 971–977.
2. Cell entry mechanisms of SARS-CoV-2. Shang, J. et al. Proc Natl Acad Sci USA. (2020) 117, 11727–11734.
3. Evolutionary and structural analyses of SARS-CoV-2 D614G spike protein mutation now documented worldwide. Isabel, S. et al. Sci Rep. (2020) 10, 14031.
4. Optimized Pseudotyping Conditions for the SARS-COV-2 Spike Glycoprotein. Johnson, MC. et al. J Virol. (2020) 94, e01062-20.
 
 
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頁(yè)面更新：2024-02-29 10:18:37