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產(chǎn)品選擇指南

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可溶性微流體慢病毒轉(zhuǎn)導增強劑
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價格（元） 說明書 數(shù)量
Clontech 631478 Lenti-X™ Transduction Sponge 24 Rxns ￥6,169
 
慢病毒包裝系統(tǒng) → 293T包裝細胞 → 慢病毒滴度測定 → 慢病毒濃縮 → 慢病毒純化 → 轉(zhuǎn)導增強 → 整合位點檢測
 
Lenti-X Transduction Sponge是一項可以在不使用微流體儀器的情況下實現(xiàn)微流體驅(qū)動的提高慢病毒轉(zhuǎn)導效率的新技術。一塊海綿可以轉(zhuǎn)導105-107個細胞，而不需要進行耗時的spinoculation操作，或者使用為了保持細胞活力需要進行優(yōu)化的化學轉(zhuǎn)導增強劑。Lenti-X Transduction Sponge能夠高效轉(zhuǎn)導廣泛細胞類型，包括常見細胞系和難轉(zhuǎn)導的原代細胞。
 
Lenti-X Transduction Sponge是一種微流體海綿，由鈣離子交聯(lián)的海藻酸鹽制成，這是一種符合GMP標準、FDA批準的生物材料，具有高生物相容性和低毒性的特點。交聯(lián)的海藻酸鹽經(jīng)過溫和的冷凍凝膠化過程，形成孔徑均勻、大小在20-300 μm的海綿。這種大孔藻酸鹽結(jié)構(gòu)，可以促進快速有效的慢病毒轉(zhuǎn)導，而不需要spinoculation操作或使用化學轉(zhuǎn)導增強劑。 它能夠促進靶細胞和慢病毒的共定位，消除常用慢病毒轉(zhuǎn)導方法所帶來的的生物轉(zhuǎn)運問題。簡單易用的操作流程減少了對細胞的處理，需要的總反應體系更小，產(chǎn)生的轉(zhuǎn)導效率與傳統(tǒng)方法相當或優(yōu)于傳統(tǒng)方法。
 
Lenti-X Transduction Sponge是如何工作的呢？
將靶細胞和慢病毒混合后添加至海綿上，37℃孵育1小時，使混合物被海綿吸收進去。吸收后，向含有海綿的孔中加入細胞培養(yǎng)基，37℃孵育16-24小時。
 
次日，將海綿放在一種特定的釋放緩沖液中進行溶解，該緩沖液可解聚海藻酸鹽基質(zhì)，從而可輕松釋放出健康的轉(zhuǎn)導細胞。這些細胞可以被重新接種用于繼續(xù)培養(yǎng)和下游應用。整個操作過程用戶友好度高，更大限度地減少了對細胞的處理，總反應體系更小，減少了所需要使用的病毒用量。Lenti-X Transduction Sponge轉(zhuǎn)導效率一致性高，其轉(zhuǎn)導效率與傳統(tǒng)方法相當或者優(yōu)于傳統(tǒng)方法。
 
 
■ 概述/特點
這是一個更好的標準慢病毒轉(zhuǎn)導方法的替代方案。
· 在不需要使用基于微流體儀器的情況下，實現(xiàn)微流體驅(qū)動的慢病毒轉(zhuǎn)導效率的提高
· 跳過額外需要離心設備的勞動密集型、耗時的spinoculation操作
· 一個海綿可以在24孔板的一個孔中轉(zhuǎn)導105-107個細胞
· 簡便易用的操作流程適用于多種細胞類型（包括常規(guī)細胞系和原代細胞）
· 終結(jié)對化學增強劑（如polybrene）的依賴，這些增強劑對某些細胞類型有毒性作用并且需要在轉(zhuǎn)導期間和轉(zhuǎn)導后進行優(yōu)化以保持細胞活力
 
■ 應用
☆ 用于以下應用的慢病毒轉(zhuǎn)導：
· 基因表達
· 蛋白質(zhì)表達
· 細胞系構(gòu)建
· 疾病治療建模
· 全基因組篩選
· 利用慢病毒進行基因修飾的CAR-T研究
☆ 逆轉(zhuǎn)錄病毒和病毒樣顆粒(VLPs)的轉(zhuǎn)導
 
■ TECH NOTE
Lentiviral transduction sponge—efficient transduction with an easier workflow
 
■ 實驗例
1. 方便的適用于24孔組織培養(yǎng)板的形式。
Lenti-X Transduction Sponge使用方便，可與24孔組織培養(yǎng)板搭配使用。圖A. 每個試劑盒包含24個獨立海綿，每個海綿能夠促進多達1x107個細胞的轉(zhuǎn)導。圖B. 每個海綿具有復雜的微流體孔隙結(jié)構(gòu)，孔徑范圍在20-300 μm。所示圖像是150倍放大。圖C. 在加入樣品之前，簡單地將轉(zhuǎn)導海綿放入孔中。圖D. 將由1×105-1×107細胞和病毒組成的轉(zhuǎn)導混合物加入至海綿中，孵育1小時后，加入培養(yǎng)基，再孵育16-24小時。圖E. 將海綿轉(zhuǎn)移到15 ml錐形管中并加入釋放緩沖液，然后進行簡短的洗滌步驟，促進細胞釋放出來。
 
2. 與spinoculation 轉(zhuǎn)導方法相當?shù)霓D(zhuǎn)導效率
Lenti-X Transduction Sponge在多種細胞類型中促成與spinoculation相當?shù)?/strong>轉(zhuǎn)導水平。圖A. 使用ZsGreen1慢病毒以圖中標明的感染復數(shù)(MOIs)轉(zhuǎn)導1×106個Jurkat細胞，分別通過spinoculation和Lenti-X Transduction Sponge進行轉(zhuǎn)導。Spinoculation培養(yǎng)物在8 μg/ml polybrene存在情況下，以1400xg 32℃離心90 min。轉(zhuǎn)導48小時后通過FACS分析ZsGreen1的表達確認轉(zhuǎn)導效率。圖B. 為了進一步比較海綿轉(zhuǎn)導與Spinoculation (圖中的“Spin”)，使用ZsGreen1慢病毒以不同MOIs轉(zhuǎn)導了多種細胞類型，操作與圖A所述相同。
 
3. 保持細胞活力的同時提高T細胞轉(zhuǎn)導效率。
Lenti-X Transduction Sponge在保持細胞活力的同時，有效提高原代T細胞轉(zhuǎn)導效率。圖A. 使用MHC四聚體、抗CD3/CD28包被磁珠、Retronectin試劑（RN）+CD3或者僅CD3活化人原代T細胞。上圖顯示了CD69+表達百分比指示的48小時的活化水平。然后，使用轉(zhuǎn)導海綿以特定感染復數(shù)（MOI）轉(zhuǎn)導ZsGreen1慢病毒至1×106個活化細胞，轉(zhuǎn)導24小時。在轉(zhuǎn)導后48小時進行FACS分析確定%ZsGreen1。圖B. 通過7-AAD染色和FACS分析測定轉(zhuǎn)導后48小時的細胞存活率。
 
4. 不同細胞量和不同轉(zhuǎn)導時間情況下表現(xiàn)出一致的轉(zhuǎn)導效率，不同海綿間的變異性低。
Lenti-X Transduction Sponge在不同的細胞數(shù)量和轉(zhuǎn)導時間的情況下表現(xiàn)出一致的轉(zhuǎn)導效率，不同海綿間的變異性低。圖A. 使用ZsGreen1慢病毒，以特定感染復數(shù)(MOIs) 去轉(zhuǎn)導一定數(shù)量的Jurkat細胞，分別使用RetroNectin試劑+ spinoculation (RN + spin)操作流程或者轉(zhuǎn)導海綿轉(zhuǎn)導24小時。圖B. 使用ZsGreen1慢病毒，通過轉(zhuǎn)導海綿轉(zhuǎn)導不同數(shù)量的Jurkat細胞4、9、24或48小時(MOI=10)。圖C. 使用ZsGreen1慢病毒(MOI=2.5)轉(zhuǎn)導1×106個Jurkat細胞，每周重復6次，持續(xù)4周，以評估板間變異性(%CV=12.6)。在所有實驗中，ZsGreen1的表達是在轉(zhuǎn)導48小時后使用流式細胞儀檢測確定ZsGreen陽性細胞的百分比和平均熒光強度(MFI)來分析確定的。ZsGreen1在所有重復中的平均表達量用紅色表示(AVG)。
 
 
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可溶性微流體慢病毒轉(zhuǎn)導增強劑
 
 

頁面更新：2024-07-02 09:30:25