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產(chǎn)品選擇指南

技術服務信息

當前位置：首頁> 產(chǎn)品選擇指南 > microRNA & RNAi研究相關制品 > Small RNA克隆 > Small RNA克隆Small RNA Cloning Kit
Small RNA克隆Small RNA Cloning Kit
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價格（元） 說明書 數(shù)量
Takara RR065 Small RNA Cloning Kit 10 Rxns ￥4,322
無標題文檔
 
 
Small RNA提取 → Small RNA NGS   microRNA定量PCR → microRNA表達
  →
Small RNA克隆  
 
 
■ 制品內(nèi)容 (10 次量)
□ Package1 (-20℃保存)  
RNase Inhibitor (40 U/μl) 50 μl
10X BAP Buffer 200 μl
Alkaline Phosphatase (BAP) (0.4 U/μl) 20 μl
0.1%BSA 60 μl
3’Adaptor*1*2 10 μl
T4 RNA Ligation Buffer 600 μl
T4 RNA Ligase (40 U/μl) 20 μl
5X T4 PNK Buffer 100 μl
T4 Polynucleotide Kinase (T4 PNK) (10 U/μl) 10 μl
5’Adaptor*1 10 μl
5X RT Buffer 40 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each) 90 μl
PCR-R & RT-Primer (50 pmol/μl)*1*3 20 μl
RTase (RNaseH free) (200 U/μl) 10 μl
2X PCR Buffer 250 μl
PCR Primer F (50 pmol/μl)*1 10 μl
TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl) 10 μl
Control RNA (5 pmol/μl)*4 10 μl
□ Package2 (4℃保存)  
3M Sodium Acetate (pH 5.2) 200 μl
Dr.GenTLE Precipitation Carrier*5 80 μl
2X B/W Buffer 2.7 ml
Magnosphere™ MS300/Streptavidin 100 μl
RNase free dH2O 10 ml
 
*1 3’Adaptor、5’Adaptor、PCR Primer F及PCR-R、RT-Primer上都帶有Sse8387Ⅰ酶切位點，使用Sse8387Ⅰ酶切后的PCR產(chǎn)物可以與Pst I酶切的載體進行連接克隆。本試劑盒中不備有限制酶和克隆用載體，請另外準備。
*2 3’Adaptor已用生物素標記。
*3 PCR用的Reverse Primer，也可以作為反轉錄引物使用。
*4 Control RNA是一條21mer、5’端磷酸化的RNA。
*5 Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094)。
 
 
■ 制品說明
近幾年的研究表明，在細胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)的RNA中有許多是非編碼RNA，它們有著重要的功能，這些RNA被稱為功能性RNA，其中倍受關注的是18-26 個堿基的低分子RNA，這些低分子RNA的功能有：
① mRNA水平抑制基因表達。
② 翻譯水平抑制基因表達。
克隆是分析小RNA的有效方法之一。由于小RNA與mRNA不同，它不具有PolyA tail，因此，在克隆時，需在小RNA的5’端和3’端分別加上RNA接頭或者RNA/DNA雜合形式的接頭，經(jīng)RT-PCR后進行PCR。
本試劑盒主要用于cDNA的合成和小RNA的克隆。
試劑盒通過簡單的磁珠吸附操作即可純化小RNA反轉錄得到的cDNA，省去了在接頭連接之后切膠回收等復雜操作步驟。擴增得到的cDNA可以直接用于TA克隆，或者利用接頭中帶有的酶切位點進行克隆。
使用本試劑盒對小RNA (Small RNA) 進行克隆時的操作流程見圖1。起始的Small RNA是由總RNA 經(jīng)過電泳及切膠回收得到的。詳細步驟如下：
1. 將Small RNA進行BAP處理，5’端去磷酸化。
2. 將帶有生物素標記的RNA/DNA雜合形式的接頭與BAP處理后的Small RNA的3’端進行連接。
3. 用標記Streptoavidin的磁珠，回收帶有生物素標記接頭的Small RNA，然后進行5’端磷酸化反應。
4. 將5’端連接上RNA/DNA嵌合的接頭后，使用RT Primer和反轉錄酶進行反轉錄反應。
5. 從磁珠上回收合成的cDNA后，進行PCR反應。
6. PCR片段克隆。
 
■ 各種引物及Control RNA的堿基序列
名 稱 切 點 酶 例
PCR-R & RT-Primer
    5’-GTCTCTAG CCTGCAGG ATCGATG-3’
反轉錄反應及PCR反應的Reverse引物，含有Sse8387Ⅰ的識別序列 (陰影部分)。
PCR-Primer F
5’-AAAGAT CCTGCAGG TGCGTCA-3’
PCR反應的Forward引物，含有Sse8387Ⅰ的識別序列 (陰影部分)。
Control RNA     5’p-AGAUGACGGCAACUACAAGAC-3’ 用于Control反應。
    
■ small RNA克隆流程圖
 
 

頁面更新：2024-04-01 15:52:58