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產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

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合成siRNA定量試劑盒Synthetic siRNA Quantitation Core Kit
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說明書 數(shù)量
Takara 6142 Synthetic siRNA Quantitation Core Kit 30 Rxns ￥5,112
無標(biāo)題文檔
 
 
siRNA化學(xué)合成   合成的siRNA定量   shRNA 表達(dá) → mRNA定量PCR檢測(cè)
  →   →  
siRNA體外轉(zhuǎn)錄   siRNA-ssRNA marker   Western Blot蛋白質(zhì)檢測(cè)
 
 
■ 制品內(nèi)容 (30次量)*1
1. Terminal Transferase Buffer 390 μl
2. Terminal Transferase 30 μl
3. dATP 150 μl
4. Recombinant RNase Inhibitor 30 μl
5. Oligo dT Primer*2 150 μl
6. RT Buffer 270 μl
7. RT Enzyme Mix 30 μl
8. Universal Primer (10 μM) 120 μl
9. EASY Dilution (for Real Time PCR) 1 ml
10. Control siRNA (20 nM) 10 μl
11. Control Primer (10 μM) 20 μl
*1 含 poly dA 加尾反應(yīng)及反轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 30 次反應(yīng)量、Real Time PCR用Universal Primer 120 次反應(yīng)量。
*2 本制品專用Oligo dT Primer。
 
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 制品說明
在動(dòng)物或細(xì)胞中siRNA對(duì)特定基因敲除效果的驗(yàn)證，在醫(yī)藥領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。
本制品是對(duì)合成siRNA進(jìn)行定量的試劑盒，通過Real Time PCR解析方法，對(duì)細(xì)胞、組織、血液等提取的Total RNA樣品中siRNA的殘余量進(jìn)行測(cè)定。
siRNA化學(xué)合成時(shí)一般在3’末端帶有兩個(gè)脫氧胸腺嘧啶(dT)堿基。本試劑盒在3’末端(dT)加上poly(A)尾，再利用特別設(shè)計(jì)的Oligo dT Primer進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，即使在Total RNA存在的條件下也能制備與siRNA互補(bǔ)的cDNA。以合成的cDNA為模板，利用TB Green® Premix Ex Taq Ⅱ (Tli RNaseH Plus)等試劑盒中的嵌合法進(jìn)行Real Time PCR，對(duì)合成的siRNA進(jìn)行高靈敏度的定量。
注意：1. 本試劑盒應(yīng)用于3’末端帶有脫氧胸腺嘧啶d(TT)的siRNA的定量。
2. 合成的siRNA 3’末端兩個(gè)(dT)堿基以外帶有DNA序列時(shí)，可以通過更改Oligo dT Primer序列，使用本試劑盒。
3. 合成的siRNA 3’末端沒有添加(dT)堿基或者3’末端為RNA時(shí)，不能使用本試劑盒。
 
■ 實(shí)驗(yàn)例
小鼠血液中合成siRNA的定量模擬實(shí)驗(yàn)
【 方法 】
在50 μl小鼠全血(檸檬酸鈉抗凝劑)中分別添加10 amol、1 fmol、100 fmol的Control siRNA后，使用RNAiso Plus(Code No.: 9108)及Dr. GenTLE Precipitation Carrier(Code No.: 9094)制備Total RNA(50 μl)。
使用本制品和TB Green Premix Ex Taq II (Perfect Real Time) 進(jìn)行Real Time PCR反應(yīng)，對(duì)Control siRNA進(jìn)行定量檢測(cè)。
【 結(jié)果 】
使用本制品，通過Real Time PCR解析方法，對(duì)于添加到小鼠血液中的siRNA進(jìn)行了定量。
圖. 小鼠血液樣品中摻入的Control siRNA定量結(jié)果
 
 

頁面更新：2024-04-01 16:27:07

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