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■ 制品內(nèi)容 (50 μl反應×40次) |
2X Gflex PCR Buffer (Mg2+,dNTP plus) |
1 ml |
Tks Gflex™ DNA Polymerase (1.25 U/μl) |
40 μl |
L.mono HA1 Primer (20 μM) |
60 μl |
L.mono HA2 Primer (20 μM) |
60 μl |
L.mono MonoA Primer (20 μM) |
100 μl |
L.mono LisB Primer (20 μM) |
100 μl |
L.mono Positive Control (2×104 copies/μl)*1 |
75 μl |
RNase Free dH2O |
1 ml |
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*1 L.mono Positive Control僅作為反應性能監(jiān)測的對照,濃度僅供參考。實驗時請用陽性標本提取的DNA作為陽性對照。
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【各種引物序列】 |
引物名稱 |
引物序列 |
擴增片段大小 |
L.mono HA1 Primer |
5′- GCAGTTGCAAGCGCTTGGAGTGAA -3′ |
456 bp |
L.mono HA2 Primer |
5′- GCAACGTATCCTCCAGAGTGATCG -3′ |
L.mono MonoA Primer |
5′- CAAACTGCTAACACAGCTACT -3′ |
702 bp |
L.mono LisB Primer |
5′- TTATACGCGACCGAAGCCAA -3′ |
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L.mono HA1 Primer/L.mono HA2 Primer擴增溶血素基因;L.mono MonoA Primer/L.mono LisB Primer
擴增P60蛋白的編碼基因。
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■ 制品說明 |
李斯特氏菌是革蘭氏陽性的、有鞭毛、無芽孢的短桿菌 (0.4~0.5×0.5~2.0 μm)。在分類學上屬于李斯特氏菌屬,這個屬共有8種菌。其中只有Listeria monocytogenes菌是引起人李斯特氏菌癥的病原菌。能引起發(fā)熱、頭痛的同時會引發(fā)髓膜炎、敗血癥、心內(nèi)膜炎、肺炎等多發(fā)性病癥。1980年以來作為集體食物中毒的病原菌 (即食物中毒病原菌) 引起人們注意。
本試劑盒是根據(jù)中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準《SN/T 0184.2-2006 食品中單核細胞增生李斯特氏菌檢測方法 第2部分:多重PCR方法》開發(fā)的用于檢測Listeria monocytogenes的multiplex PCR試劑盒。Tks Gflex DNA Polymerase是在Thermococcus 屬古細菌由來的DNA Polymerase的基礎上進行改良的PCR聚合酶,該酶能夠有效抑制酶與模板DNA的非特異性結合。并具有α型酶特有的高保真性和優(yōu)良的擴增性。同時體系中添加了Takara特別研發(fā)的延伸因子和提高引物特異性的物質,可以實現(xiàn)在很寬的模板濃度范圍內(nèi)進行高速、特異性強的PCR擴增。對于普通PCR酶難擴增 (含有PCR阻害物) 的GC Rich、AT Rich的目的基因均可進行有效擴增。另外其中還添加了能夠吸附PCR阻害物的成份和擴增增強因子,對于粗提品也能進行高效的PCR擴增。
本酶添加了在常溫下能夠抑制DNA Polymerase活性及3’→5’exonuclease活性的抗體,是Hot Start型DNA聚合酶。本檢測簡單快速,靈敏度高,特異性強。 |
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■ 注意事項 |
1. 根據(jù)中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準《SN/T 0184.2-2006 食品中單核細胞增生李斯特氏菌檢測方法 第2部分:多重PCR方法》,使用本試劑盒方法判斷為陽性的樣品,建議再選用其他方法,如:API、生化鑒定和協(xié)同溶血 (cAMP) 試驗等,進行進一步確認。
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2. PCR反應是靈敏度非常高的反應。為防止污染,建議從反應液的配制到檢測的實驗過程中,設定以下3個實驗區(qū)域,并進行物理性隔離。 |
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區(qū)域1:反應液的配制及分裝。此時不要開閉裝有擴增產(chǎn)物或檢測樣品的Tube管。 |
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區(qū)域2:檢測樣品的制備。此時不要開閉裝有擴增產(chǎn)物或檢測樣品的Tube管。 |
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區(qū)域3:向反應液中添加檢測樣品,進行反應、檢出。 |
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