|
■ 制品內(nèi)容 (25 μl反應(yīng)×40次量) |
Premix Ex Taq™ (Probe qPCR) (2X Conc.)*1 |
500 μl |
ROX Reference Dye (50X Conc.)*2 |
20 μl |
ROX Reference Dye II (50X Conc.)*2 |
20 μl |
Salm P1 Primer (10 μM) |
20 μl |
Salm P2 Primer (10 μM) |
20 μl |
Probe for Salm (25X) |
40 μl |
Salm Positive Control (5×105 copies/μl)*3 |
30 μl |
RNase Free dH2O |
1 ml |
|
*1 內(nèi)含TaKaRa Ex Taq HS,dNTP Mixture,Mg2+, Tli RNaseH等。
*2 只使用在Life Technologies等的Real Time PCR擴(kuò)增儀上,用以校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差。StepOnePlus Real-Time PCR System使用ROX Reference Dye,7500 Fast Real-Time PCR System使用ROX Reference Dye II 。使用Thermal Cycler Dice™ Real Time System II 時(shí)不必添加。
*3 Salm Positive Control僅作為反應(yīng)性能監(jiān)測的對(duì)照,濃度僅供參考。實(shí)驗(yàn)時(shí)請(qǐng)使用陽性標(biāo)本提取的DNA作為陽性對(duì)照。 |
|
|
|
【各種引物序列】 |
引物名稱 |
引物序列 |
Salm P1 Primer |
5′- CTCACCAGGAGATTACAACATGG -3′ |
Salm P2 Primer |
5′- AGCTCAGACCAAAAGTGACCATC -3′ |
Probe for Salm |
5′- FAM-CACCGACGGCGAGACCGACTTT-TAMRA -3′ |
|
|
序列參考《SN/T 1059.7-2010 進(jìn)出口食品中沙門氏菌檢測方法 實(shí)時(shí)熒光PCR法》。
|
|
■ 制品說明 |
沙門氏菌(Salmonella) 是重要的腸道致病菌,這一類細(xì)菌在自然界中分布很廣,其中有2,500多種被確認(rèn)為血清型。近年來由于Salmonella Enteritidis引起的食物中毒急劇增加。本試劑盒是根據(jù)中華人民共和國出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《SN/T 1059.7-2010 進(jìn)出口食品中沙門氏菌檢測方法 實(shí)時(shí)熒光PCR法》開發(fā)的用于定性檢測沙門氏菌的Real Time PCR試劑盒。試劑盒中采用一種 2X濃度的Premix Type試劑,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),PCR反應(yīng)液的配制十分方便簡單。制品中的DNA聚合酶使用了改良后的Hot Start法用 DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS,與Takara精心研制的Real Time PCR用Buffer組合使用,可以有效抑制非特異性的PCR擴(kuò)增,大大提高PCR的擴(kuò)增效率,能進(jìn)行高靈敏度的Real Time PCR擴(kuò)增反應(yīng)。本檢測無需電泳,簡單快速,靈敏度高、特異性強(qiáng)。 |
|
■ 保存 |
-20℃ |
注意:
|
Premix Ex Taq(Probe qPCR)4℃保存(穩(wěn)定性高達(dá)6個(gè)月)。
運(yùn)輸儲(chǔ)存全程需要高度防污染。
收貨后4℃保存。使用前輕輕顛倒以確保試劑完全溶解并充分混勻。
可在-20℃長期保存,一旦融解請(qǐng)于4℃保存,并在6個(gè)月之內(nèi)使用完。 |
|
|
■ 注意事項(xiàng) |
1. Real Time PCR擴(kuò)增儀的使用請(qǐng)按照儀器說明書進(jìn)行。
|
2. 判斷為陽性的樣品,要用微生物學(xué)方法進(jìn)行再確認(rèn),參照SN0170。 |
3. PCR反應(yīng)是靈敏度非常高的反應(yīng)。為防止污染,建議從反應(yīng)液的配制到檢測的實(shí)驗(yàn)過程中,設(shè)定以下3個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域,并進(jìn)行物理性隔離。 |
|
區(qū)域1:反應(yīng)液的配制及分裝。此時(shí)不要開閉裝有擴(kuò)增產(chǎn)物或檢測樣品的Tube管。 |
|
區(qū)域2:檢測樣品的制備。此時(shí)不要開閉裝有擴(kuò)增產(chǎn)物或檢測樣品的Tube管。 |
|
區(qū)域3:向反應(yīng)液中添加檢測樣品,進(jìn)行反應(yīng)、檢出。 |
|
由于本制品使用Real Time PCR法,擴(kuò)增反應(yīng)與檢測同時(shí)進(jìn)行,反應(yīng)后的擴(kuò)增產(chǎn)物不需要再進(jìn)行電泳。為了避免污染,嚴(yán)禁從Tube管中取出擴(kuò)增產(chǎn)物。 |
4. 本制品是使用Real Time PCR擴(kuò)增儀對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析、判定。當(dāng)Real Time PCR擴(kuò)增儀的Auto功能不適合時(shí),將會(huì)導(dǎo)致結(jié)果判定錯(cuò)誤。此時(shí)可參照Real Time PCR擴(kuò)增儀說明書進(jìn)行手動(dòng)設(shè)定。 |
5. 使用Premix Ex Taq (2X Conc.) 時(shí),請(qǐng)上下顛倒輕輕混合均勻,避免起泡,經(jīng)輕微離心后使用。試劑沒有混勻時(shí)反應(yīng)性能會(huì)有所下降,本制品不能用振蕩器混勻。Premix Ex Taq (2X Conc.) 于-20℃保存時(shí)容易形成沉淀,此時(shí),輕輕用手握一會(huì)兒或室溫放置一段時(shí)間后,顛倒混勻可以完全融解。 |
|
|
|