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機構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

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肉種鑒定試劑盒CycleavePCR 肉種判別 Kit (6種)
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價格(元) 說明書 數(shù)量
Takara CY218 CycleavePCR 肉種判別 Kit (6種) 20 Rxns each ¥2,512
無標(biāo)題文檔
 
■ 制品內(nèi)容 (25 μl反應(yīng)×120次量、 各20次×6種)
2X CycleavePCR Reaction Mix (2×conc.) 750 μl×2(120 次)
Primer·Probe Mix-1 (for beef) (5X conc.)*1 100 μl(20 次)
Primer·Probe Mix-2 (for pork) (5X conc.)*1 100 μl(20 次)
Primer·Probe Mix-3 (for chicken) (5X conc.)*1 100 μl(20 次)
Primer·Probe Mix-4 (for rabbit) (5X conc.)*1 100 μl(20 次)
Primer·Probe Mix-5 (for horse meat) (5X conc.)*1 100 μl(20 次)
Primer·Probe Mix-6 (for mutton) (5X conc.)*1 100 μl(20 次)
dH2O 1 ml
Control DNA for beef*2 50 μl(10 次)
Control DNA for pork*2 50 μl(10 次)
Control DNA for chicken*2 50 μl(10 次)
Control DNA for rabbit*2 50 μl(10 次)
Control DNA for horse meat*2 50 μl(10 次)
Control DNA for mutton*2 50 μl(10 次)
   
*1 含有熒光標(biāo)記探針,要注意避光。。
*2 Control DNA為確認(rèn)反應(yīng)性能的陽性對照,濃度約為 2 ng/μl。
 
 
■ 制品說明
CycleavePCR 肉種鑒定Kit (6種) 是以線粒體DNA上Cytochrome C oxidase Subunit I (COX I) 基因區(qū)域的動物物種間多態(tài)性為基礎(chǔ),對牛、豬、雞、馬、羊、兔6種肉類進(jìn)行鑒定,使用Thermal Cycler Dice Real Time System II等Real Time PCR專用儀器進(jìn)行擴增檢測。
PCR法是以微量的DNA為模板,對目的基因進(jìn)行特異性擴增的技術(shù)。由DNA熱變性、引物退火、DNA聚合酶作用下引物的延伸三個步驟循環(huán)往復(fù),可以在短時間內(nèi)擴增DNA達(dá)100萬倍以上。使用Real Time PCR專用擴增儀可對擴增產(chǎn)物進(jìn)行實時監(jiān)測。本制品中的DNA聚合酶采用了Hot Start PCR專用酶Takara Ex Taq HS,可以在更短時間內(nèi)進(jìn)行高靈敏度的檢出,并能有效防止在熱循環(huán)前由引物錯配或引物二聚體產(chǎn)生的非特異性擴增。
Kit中使用了COX I 區(qū)域設(shè)計的特異性引物,對各動物物種進(jìn)行特異性擴增,并使用與各物種擴增產(chǎn)物特異性結(jié)合的探針進(jìn)行檢測。該檢測使用了Cycling Probe法,Cycling Probe法是由RNA和DNA構(gòu)成的雜合探針與RNase H組合使用的高靈敏度檢出法,能夠高效率地檢出擴增過程中及擴增結(jié)束時的目的基因片段。Cycling Probe內(nèi)部含有RNA堿基,一端標(biāo)記熒光物質(zhì),另一端標(biāo)記熒光淬滅物質(zhì),當(dāng)探針處于完整狀態(tài)時,由于熒光淬滅作用抑制熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,但當(dāng)探針與擴增產(chǎn)物中的互補序列雜交后,RNase H在RNA部分將探針切斷,淬滅抑制作用解除,熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,通過測定熒光強度,能夠?qū)崟r監(jiān)控擴增產(chǎn)物量。制品中目的基因檢測用探針使用了FAM標(biāo)記,內(nèi)參照檢測用探針使用了ROX標(biāo)記,在同一反應(yīng)管內(nèi)對目的基因及內(nèi)參照 (Internal Control) 同時進(jìn)行擴增,通過兩種不同熒光標(biāo)記探針可以對目的基因和內(nèi)參基因同時檢定,實現(xiàn)雙通道同步檢測。其中,對內(nèi)參照反應(yīng)的檢測,可以監(jiān)控反應(yīng)是否正常進(jìn)行,防止假陰性結(jié)果的產(chǎn)生。使用Real Time PCR進(jìn)行檢測,無需電泳便可迅速判定結(jié)果 (約80 min) 。 本制品中含有確認(rèn)PCR擴增反應(yīng)是否正常的陽性對照用模板、引物和檢出用探針,可確認(rèn)反應(yīng)液中有無PCR阻害物。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 操作注意
1. Real Time PCR儀的使用請按照說明書進(jìn)行。
2. 如果探針、引物因混入核酸酶而被降解,則不能準(zhǔn)確檢測。實驗者的汗液和唾液也可能會帶入核酸酶,操作中應(yīng)注意。
3. 建議從反應(yīng)液的配制到檢測樣品的添加,設(shè)定以下3個實驗區(qū)域,并進(jìn)行物理性隔離(參考“補充:關(guān)于區(qū)域劃分”)。在各區(qū)域要避免開閉含有擴增產(chǎn)物的反應(yīng)管。
區(qū)域1:反應(yīng)液的配制及分裝。
區(qū)域2:檢測樣品的制備。
區(qū)域3:向反應(yīng)液中添加檢測樣品,進(jìn)行反應(yīng)、檢出。
由于本Kit使用了Real Time PCR的方法,擴增反應(yīng)與檢測同時進(jìn)行,反應(yīng)后的擴增產(chǎn)物無需進(jìn)行電泳。另外,為了避免污染,嚴(yán)禁從Tube中取出擴增產(chǎn)物。
 
 

頁面更新:2023-08-22 09:32:17