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| ■ 制品內(nèi)容 (25 μl反應(yīng)×50 次量) |
| 2X Premix for Bovine and Ovine*1 |
650 μl |
| Primer Mix for Bovine and Ovine*2 |
50 μl |
| Probe Mix for Bovine and Ovine*3 |
50 μl |
| dH2O |
1 ml |
| Control DNA for Bovine and Ovine (10 ng/μl each) |
15 μl |
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*1 2X Premix For Bovine and Ovine中含有反應(yīng)用dNTP Mixture、Buffer、酶等。
*2 Primer Mix for Bovine and Ovine中含有擴(kuò)增用引物及內(nèi)參照 (Internal Control)。
*3 Probe Mix for Bovine and Ovine中含有檢測用探針，須避光保存。 |
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| ■ 制品說明 |
本制品是利用Real Time PCR技術(shù)快速檢測牛*、羊（綿羊和山羊）基因組DNA的試劑盒。采用雙標(biāo)記熒光PCR技術(shù)，根據(jù)線粒體DNA cytochrome c oxidase subunit I（COX I）基因上動(dòng)物種間多態(tài)性的差異進(jìn)行牛、羊源性成分鑒定。應(yīng)用多色熒光檢測技術(shù)，對(duì)反應(yīng)液中含有的三種不同熒光染料進(jìn)行三通道同步檢測，在同一反應(yīng)管內(nèi)對(duì)牛、羊的COX I基因及內(nèi)參照（Internal Control）同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增，并通過標(biāo)記三種不同熒光物質(zhì)（FAM、ROX、HEX）的特異性探針進(jìn)行特異性雜交，實(shí)現(xiàn)多色熒光同步檢測。其中對(duì)內(nèi)參照反應(yīng)的檢測，可以監(jiān)控反應(yīng)是否正常進(jìn)行，防止假陰性結(jié)果。制品中2X Premix for Bovine and Ovine已經(jīng)將DNA聚合酶、反應(yīng)用Buffer、dNTP等試劑預(yù)混在一起。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，PCR反應(yīng)液的配制十分簡單。PCR反應(yīng)用DNA聚合酶使用了Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq® HS，與Takara精心研制的Real Time PCR用Buffer組合使用，可以有效抑制非特異性的PCR擴(kuò)增，大大提高了PCR的擴(kuò)增效率。本檢測無需電泳，簡單快速。本制品適用于食品、化妝品和飼料等樣品中牛、羊（綿羊和山羊）源性混合成分的鑒別。
本試劑盒（原Code No. D321）為《SN/T 2051-2008食品、化妝品和飼料中牛羊豬源性成分檢測方法實(shí)時(shí)PCR法》附錄E所述試劑盒。 |
| * 本制品可對(duì)黃牛 (Bos taurus)成分進(jìn)行檢測，如果想同時(shí)進(jìn)行水牛 (Bubalus bubalis) 、牦牛 (Bos grunniens)的檢測，請(qǐng)選擇使用RR910制品。由于檢測品種不同，擴(kuò)增序列可能存在變異，因此某些品種的牛和羊可能無法被檢出。另外，對(duì)于鴨（Duck）、鵝（Goose）、馬（Horse）、豬（pork）、雞（chicken）、兔（rabbit）、人（Human）、白尾鹿（White Tail Deer）、印度梅花鹿（Axis Deer）、火雞（Turkey）和 鴕鳥（Ostrich）等這些物種，添加genome DNA 10 ng量時(shí)，無檢出或有檢出時(shí)但Ct值在35以上。（上述記載以外的物種沒進(jìn)行過確認(rèn)。） |
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| ■ 保存 |
| -20℃。 |
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| ■ 注意事項(xiàng) |
1. 本試劑盒檢測靈敏度高，為了防止污染，實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作。
① 第一區(qū)：反應(yīng)液配制區(qū)。
② 第二區(qū)：樣品制備區(qū)。
③ 第三區(qū)：樣品添加區(qū)及反應(yīng)檢測區(qū)。
三個(gè)區(qū)之間必須進(jìn)行物理性隔離， 避免人為因素造成污染。
2. 2X Premix for Bovine and Ovine制品融解后，請(qǐng)上下顛倒輕輕均勻混合，避免起泡，并經(jīng)輕微離心后使用。
3. Probe Mix for Bovine and Ovine應(yīng)避光保存。
4. 配制Real Time PCR反應(yīng)液時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照射。
5. 反應(yīng)液的配制、分裝請(qǐng)一定使用新的 (無污染的) 槍頭、Microtube等，盡量避免污染。 |
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| ■ 各物種檢出結(jié)果例 |
| 物種 |
FAM通道檢測結(jié)果
(Bovine檢出)
(Genome DNA 10 ng量添加) |
ROX通道檢測結(jié)果
(Ovine檢出)
(Genome DNA 10 ng量添加) |
| 鴨（Duck） |
沒有檢出 |
沒有檢出 |
| 鵝（Goose） |
有Ct值，但大于35圈 |
沒有檢出 |
| 馬（Horse） |
沒有檢出 |
有Ct值，但大于35圈 |
| 豬（Pork） |
沒有檢出 |
沒有檢出 |
| 雞（Chicken） |
沒有檢出 |
沒有檢出 |
| 兔（Rabbit） |
沒有檢出 |
沒有檢出 |
| 人（Human） |
沒有檢出 |
沒有檢出 |
| 白尾鹿（White Tail Deer) |
有Ct值，但大于35圈 |
沒有檢出 |
| 印度梅花鹿（Axis Deer） |
沒有檢出 |
沒有檢出 |
| 火雞（Turkey） |
沒有檢出 |
有Ct值，但大于35圈 |
| 鴕鳥（Ostrich） |
有Ct值，但大于35圈 |
有Ct值，但大于35圈 |
| 黃牛（Bos taurus） |
有檢出 |
有上翹，無Ct值 |
| 綿羊（Sheep） |
沒有檢出 |
有檢出 |
| 山羊（Goat） |
沒有檢出 |
有檢出 |
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| Note：上述表格記載以外的物種沒進(jìn)行過確認(rèn)。 |
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