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機構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

雙鏈DNA的制備方法

制備方法:
本工藝適用于Oligo DNA的再溶解,并互補配對形成雙鏈Oligos
1. 開蓋前進行離心,確保樣品集中于容器底部。
2. 使用STE Buffer (10 mM Tris pH8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA) 溶解樣品至合適的濃度。
 
舉例如下:
Oligo(nmol) 100 μM (退火后終濃度) 50 μM (退火后終濃度)
Buffer體積
(μl/each)
退火后總體積
(μl)
Buffer體積
(μl/each)
退火后總體積
(μl)
10 50 100 100 200
50 250 500 500 1000
* 參考隨樣品附送的ODS (即Oligo Data Sheet)的樣品摩爾數(shù)進行相應(yīng)樣品量的溶解Buffer加入體積的計算。
 
3. 將二條鏈等體積混合。
4. 94℃保溫5分鐘。
5. 停止加熱,自然冷卻至室溫。
6. -20℃保存。
 
注意:為避免反復(fù)凍融,請分份進行保存。
 
關(guān)于退火的說明:
1. 兩條或多條oligo進行退火時,即便序列理論上可以完全互補,但實際退火過程中由于oligo的Tm值、GC含量、二級結(jié)構(gòu)、純度、濃度差異等原因,并不一定能達到100%完全退火。并且在后期使用過程中,由于操作溫度、buffer組分等原因,都可能造成退火產(chǎn)物有一定比例的雙鏈分離。以上因素均有可能影響客戶最終實驗結(jié)果,請客戶于使用前自行確認,本公司僅對單條oligo產(chǎn)品的序列、純度等提供承諾,望請理解。
2. 本公司提供退火及退火精制服務(wù):
退火樣品:僅按照標(biāo)準(zhǔn)方法進行退火操作,并不承諾退火效果(退火效果取決于兩條鏈的序列情況及Tm值等)。提供退火報告,但不對退火后的產(chǎn)物進行檢測,無檢測結(jié)果。產(chǎn)物中可能殘留較多比例的單鏈未退火oligo;
退火精制樣品:僅按照標(biāo)準(zhǔn)方法進行退火操作后,進行PAGE精制,純化得到單一條帶的雙鏈退火產(chǎn)物。提供退火報告,報告中包含退火精制后的PAGE電泳結(jié)果。承諾提供的最終退火產(chǎn)物為PAGE級純度,但產(chǎn)物中仍可能存在微量的單鏈未退火oligo。此外,如Tm較低時,退火產(chǎn)物在后續(xù)使用過程中,隨環(huán)境溫度的升高,會有相應(yīng)比例的雙鏈分離。
 
 
 

頁面更新:2019-08-30 13:15:44