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大片段DNA的測序

■ 鳥槍法 (Shot Gun Sequencing) 測序

◇ 鳥槍法測序的操作方法

1. 對(duì)欲測序的DNA用物理方法進(jìn)行切斷處理，然后對(duì)片段DNA進(jìn)行末端平滑化及磷酸化處理。
2. 進(jìn)行Agarose電泳，切膠回收適當(dāng)長度的片段DNA。
3. 將回收的DNA片段連入平端載體中，然后轉(zhuǎn)化，挑選克隆。
4. 挑選一定數(shù)量的陽性克隆進(jìn)行DNA測序。
5. 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行編輯，最后拼接成一條大片段的DNA序列。

◇ DNA測序量

應(yīng)該進(jìn)行的DNA測序量以DNA片段實(shí)際長度的5倍量進(jìn)行計(jì)算，對(duì)每個(gè)反應(yīng)的有效測序長度定義為650 Bases。如：對(duì)10 kb的DNA片段進(jìn)行測序時(shí)，可以按以下方法進(jìn)行計(jì)算：
測序量＝10,000 Bases×5/650 Bases＝77個(gè)反應(yīng)

◇ 結(jié)果編輯

按上述所示計(jì)算的反應(yīng)數(shù)量進(jìn)行DNA測序，然后對(duì)其所有結(jié)果進(jìn)行編輯。此時(shí)的測序結(jié)果會(huì)拼接成數(shù)個(gè)DNA大片段 (Contig)。

◇ 補(bǔ)缺工作

結(jié)果編輯工作結(jié)束后，會(huì)發(fā)現(xiàn)在數(shù)個(gè)DNA大片段 (Contig) 間的序列沒有測定，此時(shí)應(yīng)該進(jìn)一步通過技術(shù)手段，解析那些沒有被解明的DNA序列，進(jìn)行整體DNA序列的補(bǔ)缺工作。

◇ 收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)

來樣前請(qǐng)?jiān)儍r(jià)。

◇ 其他說明

1. 病毒DNA中，特別是病毒DNA的兩端經(jīng)常會(huì)有大片段的 DNA重復(fù)序列出現(xiàn)，可能無法測序，請(qǐng)理解。
2. DNA序列中，有時(shí)會(huì)有G、A、C、T的連續(xù)結(jié)構(gòu)、G/C rich等復(fù)雜的立體結(jié)構(gòu)出現(xiàn)，此部分有可能無法測序，請(qǐng)理解。

頁面更新：2015-05-27 16:07:27

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