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基因組DNA解析—Fosmid文庫構(gòu)建

Fosmid 載體是現(xiàn)在流行的用于替代 Cosmid 載體構(gòu)建大片段文庫的新載體，與BAC文庫構(gòu)建相比，F(xiàn)osmid文庫的構(gòu)建更簡單，快速。其優(yōu)點(diǎn)如下:
1. 由于插入了大腸桿菌致育因子F^-因子，所以它在宿主菌中以單拷貝形式存在，穩(wěn)定性好。
2. Fosmid載體上有一個(gè)可誘導(dǎo)的oriV高拷貝復(fù)制起始點(diǎn)，需要時(shí)可誘導(dǎo)達(dá)到高拷貝 (50個(gè)左右) 。
3. 隨機(jī)性好，保證了每段DNA在文庫中出現(xiàn)的頻率均等。
近年來，F(xiàn)osmid文庫已被廣泛應(yīng)用于基因的圖位克隆、物理圖譜的構(gòu)建和比較基因組研究中。

■ Fosmid文庫的構(gòu)建

◇ Fosmid文庫質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

文庫的滴度≥10⁴，陽性克隆平均插入片段長度為35 kb左右。

◇ Fosmid文庫構(gòu)建的方法

1. 提取基因組DNA。
2. 將基因組DNA用物理的方法進(jìn)行切斷處理，然后對DNA片段進(jìn)行末端平滑磷酸化處理。
3. 進(jìn)行脈沖電泳，回收38 kb-48 kb之間的DNA片段。
4. 將回收后的DNA片段連接到特定的載體上。
5. 將連接液進(jìn)行包裝，轉(zhuǎn)染。
6. 通過一系列實(shí)驗(yàn)確認(rèn)文庫質(zhì)量。
7. 根據(jù)客戶需要可以進(jìn)行Fosmid DNA末端測序，也可以進(jìn)行文庫甘油菌保存。

◇ 對客戶提供樣品的要求

1. 基因組DNA：要求完整，純度高，無RNA污染，總量大于50 μg。
2. 動(dòng)、植物組織：要提供新鮮且單一的組織20 g，如果組織含油脂很多，組織提供量還需要再多些 (注：如果油脂過多，DNA收量少)。
3. 菌體：要求提供培養(yǎng)后立即收集，并經(jīng)過液氮或低溫速凍處理的菌體10 g以上。

◇ Fosmid文庫相關(guān)報(bào)價(jià)

NO.	操作類型	費(fèi) 用
1	基因組DNA提取	詢價(jià)
2	Fosmid文庫構(gòu)建 (提供文庫包裝液)	詢價(jià)
3	Fosmid文庫單克隆 (96 well) 甘油菌保存	詢價(jià)
4	Fosmid文庫 clone pool (96 well) 甘油菌保存	詢價(jià)
5	Fosmid單板 (96 well) DNA提取及瓊脂糖凝膠電泳	詢價(jià)
6	Fosmid單板 (96 well) DNA兩個(gè)末端測序	詢價(jià)

合計(jì)費(fèi)用：客戶要求公司進(jìn)行的所有作業(yè)類型費(fèi)用之和為合計(jì)費(fèi)用。

如果您需要進(jìn)行此項(xiàng)服務(wù)，請?zhí)顚?/STRONG>“文庫構(gòu)建服務(wù)委托書”。填寫后通過傳真或E-mail發(fā)送給我們或當(dāng)?shù)卮砩獭?/STRONG>

頁面更新：2017-04-14 09:42:12

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