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產(chǎn)品選擇指南

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細(xì)胞外囊泡提取試劑盒Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit
品牌	Code No.	產(chǎn)品名稱	包裝量	價(jià)格（元）	說明書	數(shù)量
Clontech	635741	Capturem^™ Extracellular Vesicle Isolation Kit (Mini)	20 Minipreps	￥7,486

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■ 產(chǎn)品概述

本制品是基于Capturem新型膜技術(shù)的一次性使用離心柱，可在30 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)血漿等多種生物體液樣品中細(xì)胞外囊泡（EVs）的簡單快速提取。其基本原理是根據(jù)EVs的生化性質(zhì)，選擇與其特異性結(jié)合的凝集素（非抗體）固定于Capturem™膜上，進(jìn)而對EVs進(jìn)行提取，產(chǎn)物純度高、污染少。

■ 產(chǎn)品特點(diǎn)

· 適用范圍廣— 可應(yīng)用于全血、血漿、血清、唾液、尿液、腦脊液、母乳、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等多種生物體液樣品中的EVs提取
· 快速、重復(fù)性好- 30 min內(nèi)即可從最高850 μl（Mini）或24 ml（Maxi）生物體液樣品中快速提取EVs，不同操作者也可獲得具有重復(fù)性的EVs收量
· 收量高— EVs最高收量可達(dá)10¹⁰（Mini）或10¹¹（Maxi），可獲得足夠的exosomal RNA應(yīng)用于下游的RT-qPCR、 NGS等研究
· 純度高— 提取的EVs經(jīng)Western Blot檢測表達(dá)exosome蛋白質(zhì)，而不表達(dá)nonexosomal污染蛋白質(zhì)，如calnexin和 albumin
· 完整性好- 基于凝集素的提取原理，EVs不易被破壞，TEM下觀察呈經(jīng)典形態(tài)
· 簡單易用— 試劑盒組分配備齊全，包含一次性的預(yù)清潔柱，一次性的離心柱，以及平衡、洗滌和洗脫緩沖液，且經(jīng)過優(yōu)化，操作簡便

■ 操作流程

注：1. *過濾步驟使用100-kDa MWCO的過濾裝置，過濾時(shí)間取決于樣品的類型和體積。
2. 本制品最大載樣量約為10¹⁰ EVs/column（Mini）或10¹¹ EVs/column（Maxi），多次上樣收量也不會超過最大值。

■ 實(shí)驗(yàn)例

實(shí)驗(yàn)例 1

與超速離心法相比，本制品分離得到的EVs濃度和純度更高。分別使用本制品和超速離心法從500 μl血漿樣品中分離EVs，進(jìn)行三次重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，使用Nanoparticle tracking analysis (NTA) 檢測。每種方法的粒徑分布計(jì)算以平均值（黑線）和標(biāo)準(zhǔn)誤差（紅線）顯示。結(jié)果顯示，本制品提取的EVs平均粒徑大小為81 nm（D90=110 nm），超速離心法提取的EVs平均粒徑大小為135 nm（D90=203 nm）。上圖可見，使用本制品提取的EVs具有更窄的粒徑分布范圍，且穩(wěn)定性更好。

實(shí)驗(yàn)例 2

使用本制品成功地從不同生物體液樣品中提取EVs。上圖NTA結(jié)果顯示，本制品可以應(yīng)用于多種生物體液樣品的EVs提取，如母乳、唾液、腦脊液、血清、尿液、條件培養(yǎng)基。每種方法的粒徑分布計(jì)算以平均值（黑線）和標(biāo)準(zhǔn)誤差（紅線）顯示。

實(shí)驗(yàn)例 3

對使用本制品與超速離心法提取的EVs中的目的蛋白質(zhì)進(jìn)行Western blot分析。結(jié)果顯示，與超速離心法相比，本制品提取的EVs包含更多的exosome特異性標(biāo)記物CD63、CD9和Alix，而non-exosome蛋白質(zhì)（calnexin和albumin）含量較少。因此，本制品提取的EVs純度更高、污染蛋白質(zhì)更少。

實(shí)驗(yàn)例 4

與超速離心法相比，使用本制品提取的EVs，可獲得更高的RNA收量。使用Capturem EV kit（Mini）從50 μl血漿中提取的EVs可以獲得約100 pg/μl的RNA，而使用超速離心法，至少需要300 μl血漿才能獲得同樣收量的RNA。而使用Capturem EV kit（Maxi）從大量樣本中提取的EVs，也可以獲得穩(wěn)定的RNA收量。

實(shí)驗(yàn)例 5

使用本制品提取的EVs，可獲得足夠的RNA用于下游RT-qPCR實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)例是對Capturem分離的EVs進(jìn)一步提取RNA再進(jìn)行miRNA篩選。首先使用PrimeScript RT Master Mix（Perfect Real Time）將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后使用Takara PreAmp Master Mix進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增。應(yīng)用SmartChip Real Time PCR系統(tǒng)對所得cDNA庫進(jìn)行1,200個(gè)miRNA靶標(biāo)篩選，結(jié)果檢測到108個(gè)miRNA，對表達(dá)量前8的miRNA進(jìn)行了芯片外驗(yàn)證，結(jié)果顯示miR-548w，miR-496，miR-744-3p，miR-660-3，miR-3167和miR-376A-3p在分離的EVs樣品中拷貝數(shù)最高，其中很多microRNA已被驗(yàn)證過在血漿來源的EVs中表達(dá)量較高。本實(shí)驗(yàn)例表明，Capturem分離的EVs包含足夠的RNA可用于下游的RT-qPCR實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)例 6

使用本制品提取的EVs，可獲得足夠的RNA用于下游NGS實(shí)驗(yàn)。以本制品提取的EVs中的RNA為樣本，使用SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 - Pico Input Mammalian進(jìn)行NGS建庫。Bioanalyzer trace表明構(gòu)建了良好且統(tǒng)一的文庫，后續(xù)的測序表明，構(gòu)建得到的NGS文庫基因覆蓋度良好。

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頁面更新：2024-02-01 08:19:07

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