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Double Digestion(雙酶切反應(yīng))時Universal Buffer(通用緩沖液)的使用表

■ 說明

使用二種酶同時進行DNA切斷反應(yīng)的雙酶切反應(yīng)是節(jié)省實驗操作時間的常用手段之一。Takara采用Universal Buffer表示系統(tǒng)，并對每種酶表示了在各Universal Buffer中的相對活性。盡管如此，在進行Double Digestion時，有時還會難以找到合適的Universal Buffer。
本表以在pUC系列載體的多克隆位點處的各限制酶為核心，顯示了Double Digestion可使用的最佳Universal Buffer條件。在本表中，各Universal Buffer之前表示的 [數(shù)字×] 是指各Universal Buffer的反應(yīng)體系中的最終濃度。Takara銷售產(chǎn)品中添附的Universal Buffer全為10倍濃度的緩沖液。終濃度為0.5×?xí)r反應(yīng)體系中的緩沖液則稀釋至20倍，1×?xí)r稀釋至10倍，2×?xí)r稀釋至5倍進行使用。

■ 注意

◇ 1 μg DNA中添加10 U的限制酶，在50 μl的反應(yīng)體系中，37℃下反應(yīng)1小時可以完全降解DNA。
◇ 為防止Star活性，請將反應(yīng)體系中的甘油含量盡量控制在10%以下。
◇ 根據(jù)DNA的種類，各DNA的高級結(jié)構(gòu)的差別，或當(dāng)限制酶識別位點鄰接時，有時會發(fā)生Double Digestion不能順利進行。

Enzyme	Acc I	BamH I	Bgl II	Cla I	EcoR I	EcoR V	Hinc II	Hind III	Kpn I	Nco I	Nde I
Acc I	－	0.5×K	1×T	1×M	1×M	0.5×K	1×M	1×M	1×M	1×M +BSA	1×T
BamH I	0.5×K	－	1×K	1×K	1×K	1×K	0.5×K	1×K	0.5×K	1×K +BSA	1×K
Bgl II	1×T	1×K	－	1×H	1×H	1×H	2×K	1×K	1×T	1×K +BSA	1×H
Cla I	1×M	1×K	1×H	－	1×H	1×H	1×M	1×M	1×M	1×K +BSA	1×H
EcoR I	1×M	1×K	1×H	1×H	－	1×H	1×M	1×M	1×M	1×K +BSA	1×H
EcoR V	0.5×K	1×K	1×H	1×H	1×H	－	2×T	1×K	0.5×K	1×K +BSA	1×H
Hinc II	1×M	0.5×K	2×K	1×M	1×M	2×T	－	1×M	1×M	1×M +BSA	1×T
Hind III	1×M	1×K	1×K	1×M	1×M	1×K	1×M	－	1×M	1×K +BSA	1×K
Kpn I	1×M	0.5×K	1×T	1×M	1×M	0.5×K	1×M	1×M	－	0.5×K +BSA	1×T
Nco I	1×M +BSA	1×K +BSA	1×K +BSA	1×K +BSA	1×K +BSA	1×K +BSA	1×M +BSA	1×K +BSA	0.5×K +BSA	－	1×K +BSA
Nde I	1×T	1×K	1×H	1×H	1×H	1×H	1×T	1×K	1×T	1×K +BSA	－
Not I	0.5×K +BSA	0.5×K +BSA	1×H +BSA	1×H +BSA	1×H +BSA	1×H +BSA	0.5×K +BSA	0.5×K +BSA	0.5×K +BSA	0.5×K +BSA	1×H +BSA
Pst I	1×M	1×K	1×H	1×H	1×H	1×H	1×M	1×M	1×M	1×K +BSA	1×H
Pvu I	0.5×K	1×K	1×K	1×K	1×K	1×K	0.5×K	1×K	0.5×K	1×K +BSA	1×K
Sac I	1×M	0.5×K	0.5×K	1×M	1×M	0.5×K	1×M	1×M	1×L	0.5×K +BSA	1×T
Sal I	1.5×T	1.5×T	1×H	1×H	1×H	1×H	1.5×K	1.5×K	1.5×T +BSA	1.5×T +BSA	1×H
Sma I	1×T +BSA	0.5×T +BSA	1×T +BSA	1×T +BSA	1×T +BSA	0.5×K +BSA	1×T +BSA	1×T +BSA	1×T +BSA	1×T +BSA	1×T +BSA
Spe I	1×M	1×K	1×H	1×M	1×H	1×H	1×M	1×M	1×M	1×K +BSA	1×H
Sph I	0.5×K	1×K	1×H	1×H	1×H	1×H	2×T	1×K	0.5×K	1×K +BSA	1×H
Xba I	1×M	0.5×K	2×T	1×M	1×M	2×T	1×M	1×M	1×M	1×M +BSA	1×T
Xho I	1×M	1×K	1×H	1×H	1×H	1×H	1×M	1×M	1×M	1×K +BSA	1×H

Enzyme	Not I	Pst I	Pvu I	Sac I	Sal I	Sma I	Spe I	Sph I	Xba I	Xho I
Acc I	0.5×K +BSA	1×M	0.5×K	1×M	1.5×T	1×T +BSA	1×M	0.5×K	1×M	1×M
BamH I	0.5×K +BSA	1×K	1×K	0.5×K	1.5×T	0.5×T +BSA	1×K	1×K	0.5×K	1×K
Bgl II	1×H +BSA	1×H	1×K	0.5×K	1×H	1×T +BSA	1×H	1×H	2×T	1×H
Cla I	1×H +BSA	1×H	1×K	1×M	1×H	1×T +BSA	1×M	1×H	1×M	1×H
EcoR I	1×H +BSA	1×H	1×K	1×M	1×H	1×T +BSA	1×H	1×H	1×M	1×H
EcoR V	1×H +BSA	1×H	1×K	0.5×K	1×H	0.5×K +BSA	1×H	1×H	2×T	1×H
Hinc II	0.5×K +BSA	1×M	0.5×K	1×M	1.5×K	1×T +BSA	1×M	2×T	1×M	1×M
Hind III	0.5×K +BSA	1×M	1×K	1×M	1.5×K	1×T +BSA	1×M	1×K	1×M	1×M
Kpn I	0.5×K +BSA	1×M	0.5×K	1×L	1.5×T +BSA	1×T +BSA	1×M	0.5×K	1×M	1×M
Nco I	0.5×K +BSA	1×K +BSA	1×K +BSA	0.5×K +BSA	1.5×T +BSA	1×T +BSA	1×K +BSA	1×K +BSA	1×M +BSA	1×K +BSA
Nde I	1×H +BSA	1×H	1×K	1×T	1×H	1×T +BSA	1×H	1×H	1×T	1×H
Not I	－	1×H +BSA	2×K +BSA	0.5×K +BSA	1×H +BSA	0.5×T +BSA	1×H +BSA	1×H +BSA	0.5×K +BSA	1×H +BSA
Pst I	1×H +BSA	－	1×K	1×M	1×H	0.5×T +BSA	1×H	1×H	1×M	1×H
Pvu I	2×K +BSA	1×K	－	0.5×K	1.5×K +BSA	1×K +BSA	1×K	1×K	0.5×K	1×K
Sac I	0.5×K +BSA	1×M	0.5×K	－	1.5×T +BSA	1×T +BSA	1×M	0.5×K	1×M	1×M
Sal I	1×H +BSA	1×H	1.5×K +BSA	1.5×T +BSA	－	1.5×T +BSA	1×H	1×H	1.5×T	1×H
Sma I	0.5×T +BSA	0.5×T +BSA	1×K +BSA	1×T +BSA	1.5×T +BSA	－	1×T +BSA	0.5×T +BSA	1×T +BSA	1×T +BSA
Spe I	1×H +BSA	1×H	1×K	1×M	1×H	1×T +BSA	－	1×H	1×M	1×H
Sph I	1×H +BSA	1×H	1×K	0.5×K	1×H	0.5×T +BSA	1×H	－	2×T	1×H
Xba I	0.5×K +BSA	1×M	0.5×K	1×M	1.5×T	1×T +BSA	1×M	2×T	－	1×M
Xho I	1×H +BSA	1×H	1×K	1×M	1×H	1×T +BSA	1×H	1×H	1×M	－

頁面更新：2019-10-17 16:21:55

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