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■ 制品內(nèi)容 (40 次量) |
Random Primer (9 mer) |
80 μl |
10 × Buffer |
100 μl |
dNTP Mixture |
100 μl |
(dGTP,dATP,dTTP) (各0.2 mM) |
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BcaBEST® DNA Polymerase (2 U/μl) |
40 μl |
Control DNA (λ-Hind Ⅲ Fragment) (25 ng/μl) |
10 μl |
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■ 制品說明 |
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BcaBEST® Labeling Kit是一種在DNA上標(biāo)記[α-32P]、[3H] dCTP后,可在短時間內(nèi)合成DNA 探針的試劑盒。本試劑盒的設(shè)計以A.P.Feinberg和B.Vogelstion 法為基礎(chǔ)并對其進行了改良,操作十分簡便,合成后的探針比活性高。目前我們經(jīng)常使用的Klenow fragment 存在反應(yīng)時間長、對GC 含量高的DNA 模板或具有高級結(jié)構(gòu)的DNA 攝入效率低等缺點。Bacillus caldotenax 來源的BcaBEST® DNA Polymerase是一種耐熱性的、高延伸性的DNA 聚合酶。BcaBEST® DNA Polymerase 和隨機引物 (9 mer) 在50℃~ 55℃條件下反應(yīng)10 分鐘,即可對具有高級結(jié)構(gòu)的DNA 模板進行標(biāo)記。
BcaBEST® DNA Polymerase 具有優(yōu)良的延伸性,與Klenow fragment相比,可以合成更長的探針,同時因BcaBEST® DNA Polymerase不具備exonuclease活性,反應(yīng)時間長也不會導(dǎo)致攝入效率下降。 |
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表1. 與Random Primer DNA Labeling Kit Ver.2比較 |
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BcaBEST® Labeling Kit |
Random Primer DNA Labeling Kit Ver.2 |
反應(yīng)時間 |
10分鐘 |
10分鐘 |
探針的比放射活性 |
~109 dpm/μg |
~109 dpm/μg |
模板DNA |
不受高級結(jié)構(gòu)、GC含量的影響 |
高級結(jié)構(gòu)或GC含量高時可導(dǎo)致攝入效率下降 |
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注:兩種試劑盒使用300 bp以下的DNA模板時,可導(dǎo)致攝入效率下降。 |
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■ 利用隨機引物進行DNA標(biāo)記的原理 |
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