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基因編輯后基因組序列確認(rèn)
品牌	Code No.	產(chǎn)品名稱	包裝量	價(jià)格（元）	說明書	數(shù)量
Clontech	631444	Guide-it Indel Identification Kit	10 rxns	￥6,559

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由于產(chǎn)品升級，從即日起，您訂購的以上產(chǎn)品中的組分In-Fusion HD Cloning Kit (Code No. 639648)將陸續(xù)替換為性能更高的In-Fusion^® Snap Assembly Master Mix (Code No. 638947)，該組分?jǐn)?shù)量保持不變，請以實(shí)際收到的產(chǎn)品為準(zhǔn)。如需含HD組分的舊版說明書或產(chǎn)品組分列表文件，請郵件聯(lián)絡(luò)zhukx@takarabiomed.com.cn

			基因敲除
		↗		→	→
→	→
→	→		基因敲入
		↘

基因編輯后基因組序列確認(rèn)

Guide-it^™ Indel Identification Kit

· 確認(rèn)細(xì)胞群中CRISPR/Cas9、TALENs、鋅指核酸酶進(jìn)行基因編輯后導(dǎo)入的突變位點(diǎn)基因序列
· 直接PCR與In-Fusion基因克隆技術(shù)相結(jié)合，以細(xì)胞裂解液為起始簡便、快速且準(zhǔn)確地獲得目的克隆
· In-Fusion基因克隆技術(shù)無需連接過程，僅需15分鐘即可實(shí)現(xiàn)無縫定向克隆
· 包含目的基因擴(kuò)增、克隆、制備測序用樣品所需的全部試劑的完整試劑盒

■ 產(chǎn)品說明

Guide-it Indel Identification Kit用于確認(rèn)細(xì)胞群中CRISPR/Cas9、TALENs、鋅指核酸酶進(jìn)行基因編輯后所導(dǎo)入的序列插入和缺失(indels)，本試劑盒可以提供完整的操作流程。

本試劑盒包含了目的基因擴(kuò)增、克隆、制備測序用樣品所需的全部試劑。Terra PCR Direct polymerase可直接以粗提細(xì)胞裂解液為樣品擴(kuò)增包含靶位點(diǎn)的基因組DNA片段。采用In-Fusion基因克隆技術(shù)可將擴(kuò)增獲得的目的基因片段直接克隆至預(yù)線性化pUC19載體中，而無需經(jīng)過限制性酶切處理。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至Stellar感受態(tài)細(xì)胞，通過菌落PCR擴(kuò)增靶標(biāo)區(qū)域。分析PCR產(chǎn)物的DNA序列確認(rèn)突變位點(diǎn)序列。

圖1．實(shí)驗(yàn)流程

Step1

Guide-it Indel Identification Kit用于確認(rèn)細(xì)胞群中經(jīng)過基因編輯后所導(dǎo)入的序列插入和缺失(indels)，本試劑盒可以提供完整的操作流程。本試劑盒所采用的PCR酶可以直接以粗提細(xì)胞裂解液為起始擴(kuò)增基因組DNA片段（約500-700 bp）

Step2

擴(kuò)增產(chǎn)物是來自于所有細(xì)胞包含基因編輯靶標(biāo)位點(diǎn)的基因組片段的集合。采用In-Fusion基因克隆技術(shù)可將擴(kuò)增產(chǎn)物直接克隆至預(yù)線性化pUC19載體中。

Step3

將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至經(jīng)過優(yōu)化的大腸桿菌菌株，通過菌落PCR擴(kuò)增靶標(biāo)區(qū)域

Step4

通過DNA測序分析確認(rèn)突變位點(diǎn)序列

圖2．CRISPR/Cas9基因編輯后，確認(rèn)CD81基因插入、缺失序列

轉(zhuǎn)染表達(dá)Cas9和作用于CD81基因的sgRNA至Hela細(xì)胞進(jìn)行基因編輯，采用Guide-it Indel Identification Kit制備CD81基因靶位點(diǎn)測序用樣品。選擇6個(gè)克隆進(jìn)行測序并將測序數(shù)據(jù)與野生型基因序列進(jìn)行比對，確認(rèn)CD81基因?qū)氲耐蛔兾稽c(diǎn)序列。

■ 產(chǎn)品組分

· Guide-it Indel Identification Components

	Terra PCR Direct Polymerase Mix	110 μl
	2X Terra PCR Direct Buffer (with Mg²⁺, dNTP)	1 ml×3
	Extraction Buffer 1	400 μl
	Extraction Buffer 2	40 μl
	pUC19 Cloning Vector, linearized (50 ng/μl)	10 μl
	Colony PCR Forward Primer (15 μM)	200 μl
	Colony PCR Reverse Primer (15 μM)	200 μl
	PCR-Grade Water	1 ml×6

· In-Fusion Snap Assembly Master Mix

· NucleoSpin Gel and PCR Clean-up

· Stellar Competent Cells（Code No. 636763）

■ 保存

Guide-it Indel Identification	－20℃
In-Fusion Snap Assembly Master Mix	－20℃
NucleoSpin Gel and PCR Clean-up	室溫
Stellar Competent Cells
Stellar Competent Cells ：	－70℃
其它組份：	－20℃

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頁面更新：2021-11-30 16:42:58

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