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患者自體腫瘤細胞株的制作

目前在T細胞個體化治療中腫瘤抗原的添加日漸受到重視，患者腫瘤抗原數(shù)量和質(zhì)量直接關(guān)系到最終效應(yīng)細胞的殺傷能力。比如DC+CIK的培養(yǎng)過程中，添加患者自體腫瘤組織抗原后的治療效果要比不添加時好很多。隨著腫瘤的早期診斷和早期治療的快速發(fā)展，手術(shù)中切除下來的腫瘤組織體積越來越小，傳統(tǒng)的直接把腫瘤組織裂解物添加到DC培養(yǎng)液中進行抗原遞呈的方法越來越難，而且腫瘤組織裂解物中含有的血管內(nèi)皮細胞、間質(zhì)細胞、分泌物和壞死物等非腫瘤成分直接影響療效。純度高而抗原性強的病人腫瘤細胞株的制作是一個提供自體抗原的有效方法。我公司構(gòu)建了帶有端粒酶基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，制作出患者的半永生化癌細胞株用于后續(xù)特異性治療，其簡易流程如下：

目前有：
1. 克隆端粒酶基因。
2. 端粒酶基因亞克隆到TAKARA質(zhì)粒載體pDON-AI中。
3. 使用TAKARA的逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝試劑盒制備含有端粒酶基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。
4. 手術(shù)前一天使用RetroNectin包被細胞培養(yǎng)瓶/板。
5. 患者手術(shù)腫瘤組織研磨過濾，得到單細胞懸液。
6. 洗滌RetroNectin包被的細胞培養(yǎng)瓶/板，移入單細胞懸液。
7. 貼壁培養(yǎng)一段時間后，再次用RetroNectin包被細胞培養(yǎng)瓶/板。
8. 使用制備好的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體向細胞中轉(zhuǎn)入端粒酶基因。
9. 使用G418進行抗性篩選。
10. 選擇腫瘤標志物進行腫瘤細胞鑒定。
11. 擴大培養(yǎng)，建成患者自體腫瘤細胞系。
12. 腫瘤細胞可通過反復(fù)凍融、超聲破碎或超速離心等方法處理后作為抗原提供DC。

頁面更新：2017-04-06 14:38:23

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