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機構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

當(dāng)前位置：首頁> 產(chǎn)品選擇指南 > NGS相關(guān)制品 > DNA-Seq > 帶分子標(biāo)簽的DNA-Seq分析ThruPLEX® Tag-Seq HV & ThruPLEX® Tag-Seq HV PLUS Kit
帶分子標(biāo)簽的DNA-Seq分析ThruPLEX® Tag-Seq HV & ThruPLEX® Tag-Seq HV PLUS Kit
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價格（元） 說明書 數(shù)量
Clontech R400784 ThruPLEX® Tag-Seq HV PLUS Kit 24 Rxns ￥12,429
Clontech R400785 ThruPLEX® Tag-Seq HV PLUS Kit 96 Rxns ￥47,119
Clontech R400742 ThruPLEX® Tag-Seq HV 24 Rxns ￥10,581
Clontech R400743 ThruPLEX® Tag-Seq HV 96 Rxns ￥37,951
Clontech R400735 ThruPLEX® Tag-Seq HV Core Components 96 Rxns ￥34,657
Clontech R400734 ThruPLEX® Tag-Seq HV Core Components 24 Rxns ￥9,780
Clontech R400739 ThruPLEX® HV UDI 1-24 24 Rxns ￥2,746
Clontech R400738 ThruPLEX® HV UDI Set A 96 Rxns ￥12,141
 
高起始量帶分子標(biāo)簽的DNA-Seq分析
ThruPLEX® Tag-Seq HV & ThruPLEX® Tag-Seq HV PLUS Kit
· 更可靠的DNA-Seq分析：文庫中整合了離散且均衡的分子標(biāo)簽（UMIs），提供更可靠的數(shù)據(jù)表現(xiàn)！
· 兼容更高起始量的多種樣本：5至200 ng FFPE DNA、cfDNA起始，30 μl建庫體積，無需濃縮樣本！
· 刪繁就簡：單管三步操作流程，2 h內(nèi)完成Illumina文庫構(gòu)建！
· 一致高效：無畏起始量差異，高實驗重復(fù)性、更均一的文庫覆蓋度，高GC含量區(qū)域偏差更??！
· 更適合于稀有突變分析，減少擴(kuò)增誤差及測序錯誤！
· ThruPLEX® Tag-Seq HV PLUS Kit包含酶切片段步驟，提供完整文庫構(gòu)建流程!
 
ThruPLEX®Tag-Seq HV產(chǎn)品說明
目前，將NGS用于正確檢測低頻突變的關(guān)注度逐漸上升。各領(lǐng)域科研人員正在突破稀有突變檢測靈敏度與特異性的瓶頸，而這些問題主要是由樣品準(zhǔn)備、擴(kuò)增偏差及測序錯誤所引起的。而向Illumina文庫添加特有的分子標(biāo)簽（Unique Molecular Identifiers, UMIs）與特有的雙端index(Unique Dual Indexes, UDIs)，能有效改善稀有突變檢測的準(zhǔn)確性。出于文庫制備與測序質(zhì)量直接相關(guān)的考慮，我們特別優(yōu)化推出了接頭上帶UMIs及整合UDIs的全新產(chǎn)品——ThruPLEX Tag-Seq HV試劑盒。該產(chǎn)品保留了單管流程、操作簡便的特點，支持5至200 ng input DNA起始用于稀有變異分析！
 
正確的樣本數(shù)據(jù)回溯、更小的手動操作誤差，科研人員再不用擔(dān)心珍貴樣本損失了！
 
■ 來自UMIs的“助攻”
ThruPLEX Tag-Seq HV在莖環(huán)形接頭上引入了離散的UMIs，文庫中每個DNA分子有144種可能的標(biāo)簽組合，漢明間距超過6，具有高度的差異性。我們特別設(shè)計了UMI序列，以使序列顏色分布達(dá)到平衡，在Illumina平臺上能獲得更好的測序數(shù)據(jù)。我們也謹(jǐn)慎調(diào)整了各UMI接頭的濃度，以使144種序列組合在各種DNA起始量都能均勻展現(xiàn)，減少偏差。
由7位堿基所組成的UMIs位于reads的開始位置，能夠”Tag”到DNA模板上，用于識別一致序列，減少擴(kuò)增或者測序錯誤帶來的假陽性突變。
這種特別優(yōu)化的UMIs設(shè)計，確保了更簡便的樣本demultiplexing過程，分析更容易！
 
■ “抓住”游離DNA，“揪出”稀有突變
游離DNA（cfDNA）是由細(xì)胞凋亡后所釋放，游離于體液中的DNA片段。對cfDNA的測序分析具有較大難度，特別是涉及腫瘤學(xué)研究中的稀有突變分析時。
Takara科學(xué)家采用ThruPLEX Tag-Seq HV對10 ng起始的Quan-Plex Patient-Like ctDNA標(biāo)準(zhǔn)品（AccuRef）構(gòu)建文庫，該ctDNA(循環(huán)腫瘤DNA)標(biāo)準(zhǔn)品帶有一系列特征化的不同頻率（0%，1%，5%）突變位點。文庫構(gòu)建完成后，腫瘤相關(guān)的基因采用IDT xGEN Pan Cancer Panel進(jìn)行捕獲富集。結(jié)果顯示，目標(biāo)區(qū)域的捕獲高效可靠，10 ng起始的DNA樣本約有79%的reads來自或者接近目標(biāo)區(qū)域。
 
上表數(shù)據(jù)顯示，由坐標(biāo)法或UMIs去除重復(fù)reads后的目標(biāo)區(qū)域平均覆蓋度是相似的，與Picard MarkedDuplicates所報道的PCR duplication結(jié)果一致。
隨后，Takara科學(xué)家用UMIs鑒定了ctDNA標(biāo)準(zhǔn)品中特定位點的實際突變頻率，結(jié)果顯示，檢測到的突變頻率分別與預(yù)期1%、5%的等位突變頻率接近，而陰性對照組沒有在位點處檢測到任何突變。
 
如果采用未去重的文件或僅用坐標(biāo)法去重的文件，會檢測出大量的超過0.5%等位基因頻率的不一致突變。而UMIs引入、校正后，相應(yīng)突變體的數(shù)量變少了，結(jié)果的正確性進(jìn)一步提升，顯示出UMIs在降低擴(kuò)增及測序錯誤上的重要作用。
 
更具代表性的是，使用未去重或者僅用坐標(biāo)法去重的文件分析，在預(yù)期的EGFR L858R突變附近觀察到大量的低頻及隨機等位基因頻率突變。而用UMI校正、過濾后的一致性序列reads，清除了假陽性突變，得到了預(yù)期的突變分析結(jié)果！
 
 
ThruPLEX®Tag-Seq HV PLUS Kit產(chǎn)品說明
ThruPLEX Tag-Seq HV PLUS Kit是在ThruPLEX Tag-Seq HV的基礎(chǔ)上，整合了ThruPLEX HV PLUS Enzymatic Fragmentation Module的完整文庫構(gòu)建試劑盒。ThruPLEX Tag-Seq HV PLUS Kit保留了ThruPLEX HV的顯著功能，并且無需在文庫制備之前進(jìn)行任何機械打斷或單獨的酶切片段化處理，從而實現(xiàn)了性能和速度的充分結(jié)合！
 
ThruPLEX Tag-Seq HV PLUS Kit流程概要
 
 
產(chǎn)品詳情請點擊：
 
更多實驗數(shù)據(jù)：
ThruPLEX Tag-seq HV
 
 

頁面更新：2024-01-31 13:48:44

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