| 小鼠B細胞受體分析SMARTer Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit | ||||||
| 品牌 | Code No. | 產(chǎn)品名稱 | 包裝量 | 價格（元） | 說明書 | 數(shù)量 |
| Clontech | 634422 | SMARTer® Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit | 12 Rxns | ￥12,021 |
|
|
| Clontech | 634423 | SMARTer® Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit | 48 Rxns | ￥41,068 |
|
|
| Clontech | 634424 | SMARTer® Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit | 96 Rxns | ￥65,669 |
|
|
| SMARTer Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit—捕獲BCR轉(zhuǎn)錄本完整V(D)J 可變區(qū) | |
| · 起始樣品量：10 ng-3 μg來自于脾臟、淋巴結(jié)、PBMCs 及雜交瘤的總RNA · cDNA文庫構(gòu)建經(jīng)過優(yōu)化可以靈敏、特異地檢測克隆型 · 在大多數(shù)情況下，可以準確擴增并通過測序鑒別小鼠IgG亞類 · 經(jīng)過優(yōu)化的PCR pooling策略，可以高靈敏度地從同一樣品中檢測不同鏈 · 靈活的pooling策略適用于不同的實驗需求，以比對、識別原始鏈序列 |
|
| B 細胞是適應(yīng)性免疫應(yīng)答的重要組成部分，其表面表達B細胞受體（BCR），可以識別病原體中的特定分子模式。了解BCRs圖譜（也就是由特定H,K,L基因片段構(gòu)成的受體和克隆型多樣性）不僅有助于深入了解健康個體中的適應(yīng)性免疫應(yīng)答，也有助于了解多種疾病的適應(yīng)性免疫應(yīng)答。準確確定免疫系統(tǒng)表達的克隆型和同種型有助于全面了解B細胞群體。 |
|
| 新推出的SMARTer Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit基于5’RACE和NGS技術(shù)，提供了一種靈敏，準確，優(yōu)化的BCR庫分析方法。雖然采用多重PCR可以在一個反應(yīng)中對多個BCR基因進行擴增，但也被證明在對特定序列進行擴增時存在靈敏度，特異性和偏差的問題，這些都可能帶來同種型的鑒別困難。而5’RACE方法減少了變異性并且可以從BCR重鏈或輕鏈的恒定區(qū)引發(fā)擴增。試劑盒將這些優(yōu)點與基因特異性擴增相結(jié)合可以捕獲BCR完整V(D)J可變區(qū)，提供了一種高靈敏度、可重復的B細胞庫分析方法。在大部分情況下，通過H/K/L鏈的下游測序分析可以準確鑒別克隆型，可靠確定同種型。 |
|
 |
|
| 圖1. BCR重排過程。 祖細胞發(fā)育過程中胚系基因片段經(jīng)過V,D,J重排形成兩條相同的重鏈。V,J片段重排形成兩條相同的輕鏈。V,D,J片段連接處的核苷酸隨機插入或缺失增加了額外的多樣性。B細胞經(jīng)過免疫應(yīng)答刺激后通過體細胞高頻突變（SHM）進一步引入更多的點突變。 |
|
 |
|
| 圖2. SMARTer Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit技術(shù)流程。 PanelA dT-引物起始合成一鏈cDNA，經(jīng)過兩輪PCR擴增合成cDNA文庫。PCR產(chǎn)物經(jīng)純化，片段篩選和質(zhì)量檢測后用于測序分析。 PanelB對于每個樣品，在樣品中所有mRNA 進行RT反應(yīng)后，使用者可以通過兩輪基因特異性巢式PCR特定擴增IgG 的1-3條鏈。 |
|
 |
|
| 圖3. PCR擴增及pooling流程。 對于每一個樣品，在所有mRNA進行RT后，使用者可以特定擴增IgG的1-3條鏈。每個擴增反應(yīng)需要5μl RT產(chǎn)物。第一輪PCR后，各取1μl PCR反應(yīng)產(chǎn)物用于獨立PCR反應(yīng)，分別擴增每條鏈，同一樣品添加相同的indexes，不同的樣品添加不同的indexes。經(jīng)過PCR 2最終擴增后，使用者可以通過Bioanalyzer 或Fragment Analyzer分析每個反應(yīng)產(chǎn)物，可以以此選擇哪條擴增鏈進行混合測序。 |
|
 |
|
| 圖4. 準確擴增所有5種IgG亞類。 以來自于不同IgG亞型的自有雜交瘤（10E8）和兩個ATCC雜交瘤樣品（HB-8117和TIB-127）的10 ng RNA起始，采用SMARTer Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit構(gòu)建包含BCR重鏈和輕鏈（kappa）的文庫。Panel A Bioanalyzer結(jié)果顯示了每個雜交瘤重鏈和輕鏈的基因特異性擴增結(jié)果。在每個樣品中都觀察到了700-900 bp的預期峰值。電泳圖中明顯的峰表明在這些雜交瘤中表達kappa鏈。相反，lambda鏈測序庫相對較寬并且大小低于預期。每個樣品中標注為“LM”和“UM”的峰為DNA reference marker。Panel B 采用MiXCR軟件（version 1.8）確定比對指標，與所有IG序列進行了比對分析。MiXCR軟件對前2個克隆的分析結(jié)果顯示了V,D,J等位基因及通過軟件分析確定的同種型和亞類。 |
|
| Technote： 點擊圖片查看 |
 |
產(chǎn)品詳情請點擊： |
|
頁面更新：2024-01-31 14:06:46
|
使用規(guī)章丨聯(lián)系方式丨 關(guān)于個人信息的保護丨特別說明
寶日醫(yī)生物技術(shù)（北京）有限公司
Copyright ? 2015 Takara Biomedical Technology (Beijing) Co., Ltd. All rights reserved. 京ICP備06030419號-1
京公網(wǎng)安備 110114000405號
