欧美成 人版在线_久久免视看国产_亚洲成l人在线观看线路_久久96热在精品国产网站

我們使用cookie改善您的瀏覽體驗(yàn)并提供有意義的內(nèi)容。請(qǐng)閱讀我們的cookie協(xié)議
收藏我們 在線(xiàn)訂購(gòu) CoA查詢(xún)
     

機(jī)構(gòu)用戶(hù)解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

當(dāng)前位置：首頁(yè)> 產(chǎn)品選擇指南 > NGS相關(guān)制品 > 免疫庫(kù)分析 > 人單細(xì)胞TCR profiling分析SMARTer Human scTCR a/b Profiling Kit
人單細(xì)胞TCR profiling分析SMARTer Human scTCR a/b Profiling Kit
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱(chēng) 包裝量 價(jià)格（元） 說(shuō)明書(shū) 數(shù)量
Clontech 634431 SMARTer® Human scTCR a/b Profiling Kit 96 Rxns ￥50,363
Clontech 634432 SMARTer® Human scTCR a/b Profiling Kit 480 Rxns ￥155,860
無(wú)標(biāo)題文檔
SMARTer Human scTCR a/b Profiling Kit—
闡明單細(xì)胞中T細(xì)胞受體Alpha-Beta 鏈配對(duì)
· 工作流程靈活—可以利用FACS（流式細(xì)胞術(shù)）或手動(dòng)分選細(xì)胞構(gòu)建 Illumina測(cè)序文庫(kù)
· 易于使用—優(yōu)化的index允許將96個(gè)細(xì)胞混合制成12個(gè)文庫(kù)，
   并可以進(jìn)一步混合在一個(gè)flow-cell lane中測(cè)序
· 靈敏度高—基于RACE方法可以檢測(cè)低豐度TCR變異體
· 特異性好—完整reads，大部分reads可以比對(duì)到目標(biāo)區(qū)域，提供準(zhǔn)確鏈配對(duì)信息
 
盡管批量T細(xì)胞測(cè)序有助于進(jìn)一步了解T細(xì)胞受體庫(kù)（TCR）多樣性，但是批量測(cè)序不能確定T細(xì)胞群內(nèi)特定的alpha-beta 受體鏈配對(duì)信息。由于特定的TCR alpha-beta鏈配對(duì)介導(dǎo)抗原特異性，獲得配對(duì)信息對(duì)于深入了解抗原識(shí)別，靶向免疫治療TCR的有效設(shè)計(jì)至關(guān)重要，也有助于確立T細(xì)胞群的祖先關(guān)系。單個(gè)T細(xì)胞測(cè)序可以確定特定細(xì)胞的配對(duì)信息，但是價(jià)格可能非常昂貴并涉及復(fù)雜的分析，因?yàn)榇蟛糠址椒ㄐ枰獙?duì)大量的細(xì)胞測(cè)序。
 
使用SMARTer Human scTCR a/b Profiling Kit可以解決這些問(wèn)題，在SMART cDNA Synthesis中通過(guò)采用一系列indexed oligo可以將手動(dòng)或FACS分選的96個(gè)樣品制成12個(gè)測(cè)序pool，并且這12個(gè)pool可以進(jìn)一步混合，這樣所有的96個(gè)樣品可以在一個(gè)flow-cell lane 中測(cè)序。與用于大量樣品測(cè)序的SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit 一樣，試劑采用了SMART cDNA synthesis和RACE方法，通過(guò)進(jìn)一步的TCR基因特異性PCR完整捕獲和擴(kuò)增TCR-alpha 和TCR-beta可變區(qū)構(gòu)建Illumina測(cè)序文庫(kù)，為T(mén)CR測(cè)序提供了一種高靈敏度的方法。
 
如果您需要軟件對(duì)采用本試劑盒構(gòu)建文庫(kù)測(cè)序獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行demultiplex分析，請(qǐng)登錄SMARTer Human scTCR Demultiplexer。
 
圖1. 在單細(xì)胞水平進(jìn)行T細(xì)胞研究的優(yōu)勢(shì)。
 
Panel A. T細(xì)胞受體alpha鏈 (TCR-α) 和beta鏈組成示意圖。 Panel B. 示意了難以從批量細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)中獲得alpha鏈 (TCR-α) 和beta鏈配對(duì)信息。針對(duì)稀有克隆型可以分析部分細(xì)胞中的配對(duì)信息（橙色克隆型），但是對(duì)于高表達(dá)的克隆型(TCRA V2J1, TCRA V2J2, TCRB V3D1J1, TCRB V2D1J2)可能有4種配對(duì)組合。
 
圖2. SMARTer Human scTCR a/b Profiling Kit技術(shù)流程及pooling策略。
 
Panel A. 第一鏈cDNA合成由dT引物（RT引物）起始，MMLV型逆轉(zhuǎn)錄酶（RT）會(huì)在mRNA 5’端添加幾個(gè)非模板核苷酸。SMART-Seq Indexed Oligos與這幾個(gè)非模板核苷酸互補(bǔ)結(jié)合作為模板，通過(guò)RT在第一鏈cDNA末端添加額外核苷酸序列（也就是模板轉(zhuǎn)換步驟）。試劑盒中提供8種不同的SMART-Seq Indexed Oligo，每一個(gè)SMART-Seq Indexed Oligo中內(nèi)嵌唯一的六堿基index作為細(xì)胞barcode，用于下游pooling細(xì)胞的識(shí)別。通過(guò)RT添加到cDNA末端的額外序列-被稱(chēng)為“SMART sequence”-作為接下來(lái)幾輪PCR擴(kuò)增的引物結(jié)合位點(diǎn)，確保只有來(lái)自于全長(zhǎng)cDNA的序列才能被擴(kuò)增。經(jīng)過(guò)pool（Panel B所示）和純化后，通過(guò)連續(xù)兩輪基因特異性PCR擴(kuò)增來(lái)自于TCR-α 和/或 TCR-β可變區(qū)的cDNA序列。第一輪PCR采用擴(kuò)增過(guò)的雙鏈cDNA為模板，正向引物與SMART sequence互補(bǔ)，同時(shí)包含Illumina Read 2序列（TCR Primer 1），反向引物與TCR-α和TCR-β的恒定區(qū)（即不變區(qū)）互補(bǔ)（TCR a/b Human Primer 1）。第二輪PCR以第一輪PCR產(chǎn)物為模板，采用的正向引物與第一輪PCR添加的Read 2 序列互補(bǔ)。反向引物與恒定區(qū)結(jié)合，位于PCR1 primers內(nèi)側(cè) (TCR a/b Human Primer 2 Reverse HT Index)，擴(kuò)增TCR-α和TCR-β cDNA的完整可變區(qū)及部分恒定區(qū)。正向引物和反向引物包含適用于Illumina測(cè)序平臺(tái)的接頭序列和index，可以將多達(dá)96個(gè)樣品混合用于在一個(gè)flow-cell lane中測(cè)序。Panel B. 按列混合樣品，這樣每個(gè)pool中包含8個(gè)細(xì)胞，每個(gè)細(xì)胞帶有不同index的SMART-Seq Indexed Oligo 。在PCR 2中通過(guò)正向和反向HT indexes的不同組合使用，可以將多樣品進(jìn)一步混合在一個(gè)flow-cell lane 中測(cè)序（更多信息參見(jiàn)User Manual）。
 
圖3. 96孔板中混合細(xì)胞群的分析。
 
Panel A. 基于鑒別每孔的克隆型確定細(xì)胞種類(lèi)。遺漏的7個(gè)細(xì)胞沒(méi)能通過(guò)對(duì)高于閾值的TCR-α 或TCR-β的reads數(shù)分析確定克隆型。Panel B. 配對(duì)信息分析。分析獲得了平板中34個(gè)細(xì)胞的TCR-αβ配對(duì)克隆型。Panel C. 以百分比展示了分析細(xì)胞的alpha，beta，或alpha-beta配對(duì)信息。遺漏的細(xì)胞沒(méi)有包括在分析數(shù)據(jù)中。
 
 
Technote：
點(diǎn)擊圖片查看		   SMART human scTCR-seq：
點(diǎn)擊圖片下載
 
產(chǎn)品詳情請(qǐng)點(diǎn)擊：
 
 
視頻資料：在單細(xì)胞水平對(duì)人T細(xì)胞受體庫(kù)分析的解決方案
Takara Bio USA公司Dr. Ankita Das和Dr. Sarah Taylor探討可以實(shí)現(xiàn)分析每個(gè)細(xì)胞中的TCRα和TCRβ鏈的可變區(qū)全長(zhǎng)序列，構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)的SMARTer Human scTCR a/b Profiling Kit。
 

頁(yè)面更新：2024-01-31 13:52:35

使用文獻(xiàn)