SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs) |
· 完整的BCR分析:支持分析重鏈(IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) 和輕鏈 (IgK, IgL)
· 靈活的樣本起始條件:支持10 ng - 1 μg 小鼠脾臟、骨髓、淋巴結(jié)、全血以及PBMC來(lái)源的高質(zhì)量RNA起始(RIN>7)
· 簡(jiǎn)化的操作流程:組分中的重、輕免疫球蛋白鏈引物以及酶均是預(yù)混形式
· 更可靠測(cè)序數(shù)據(jù):SMARTer Oligo上引入U(xiǎn)MI,用于校正測(cè)序錯(cuò)誤和PCR偏差
· 靈活的測(cè)序平臺(tái)選擇:可自由選擇V(D)J全長(zhǎng)分析,或只分析CDR3 |
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■ 產(chǎn)品說(shuō)明 |
SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)是一款小鼠BCR NGS文庫(kù)構(gòu)建試劑盒。該試劑盒整合SMART(Switching Mechanism at 5' end of RNA Template)全長(zhǎng)cDNA合成技術(shù)與5’RACE技術(shù),可捕獲重鏈(IgA/D/E/G/M) 和輕鏈 (IgK/L)基因完整的V(D)J可變區(qū),用于后續(xù)NGS分析。
該試劑盒支持不同起始量的RNA(RIN>7)起始,均可獲得高品質(zhì)的測(cè)序文庫(kù)。比如小鼠脾臟、骨髓或者外周血單核細(xì)胞(PBMC)純化的10 ng-1 μg的總RNA,也支持從小鼠血液或者淋巴結(jié)中提取的RNA樣本。
該試劑盒中的重、輕免疫球蛋白鏈引物以及酶均是預(yù)混形式,減少了試劑組分?jǐn)?shù)量和操作步驟。另外該試劑盒還包括特別的分子條形碼(UMI),可以消除PCR錯(cuò)誤或duplication以及測(cè)序偏向,從而確保獲得更準(zhǔn)確和可靠的結(jié)果。此外,搭配使用的雙端特殊index(UDI,Unique Dual Index),可以提供完整的從樣品到文庫(kù)構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)體驗(yàn)。
該試劑盒所建文庫(kù)支持更多樣的測(cè)序平臺(tái)。既支持Miseq平臺(tái)(分析V(D)J全長(zhǎng)信息),也支持其它Illumina平臺(tái)(分析CDR3區(qū)),節(jié)約成本。
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■ 應(yīng)用 |
· 用于分析組織和循環(huán)系統(tǒng)中的B細(xì)胞的克隆組織和多樣性,了解它們?nèi)绾斡绊態(tài)細(xì)胞的分化途徑和功能。
· 發(fā)現(xiàn)具有高親和力的BCR,以便更好地為疫苗接種或傳染病治療提供指導(dǎo)。
· 追蹤抗原特異性B細(xì)胞在HIV以及其他疾病的小鼠模型中過(guò)繼轉(zhuǎn)移后的變化和遷移。
· 檢查BCR序列,以研究針對(duì)新表位的自體抗體隨時(shí)間的變化,以及這些變化如何與嚴(yán)重的自身免疫疾病相關(guān)聯(lián),如狼瘡。 |
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■ 建庫(kù)原理 |
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■ 不同起始量的克隆型檢測(cè)數(shù)據(jù) |
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為了評(píng)價(jià)SMART-Seq Mouse BCR (with UMIs)的性能,以10 ng,100 ng和1,000 ng小鼠脾臟來(lái)源RNA起始制備文庫(kù),生成150萬(wàn)個(gè)測(cè)序reads。
Panel A. 檢測(cè)所有重鏈(IgA/D/G/M,除了IgE,因?yàn)樗谡P∈髽颖局械谋磉_(dá)量非常低)和輕鏈 (IgK/L)。結(jié)果顯示,隨著起始量的增加,檢測(cè)到的克隆型數(shù)量也隨之增加。
Panel B. 結(jié)果顯示,重鏈和輕鏈的克隆型數(shù)量隨著起始量的增加也隨之增加。
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