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無(wú)標(biāo)題文檔

反轉(zhuǎn)錄酶PrimeScript系列

實(shí)現(xiàn)更高性能

反轉(zhuǎn)錄酶PrimeScript系列

    ◆ PrimeScript RTase的特點(diǎn)
    ◆ PrimeScript選擇指南
    ◆ PrimeScript產(chǎn)品列表

高保真反轉(zhuǎn)錄酶PrimeScript RTase的特點(diǎn)

·短鏈和長(zhǎng)鏈cDNA合成均適用，背景少
·合成的cDNA準(zhǔn)確率高
·高級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA也可在42℃條件下擴(kuò)增
·非常適合Real Time PCR的PrimeScript RT系列
·通過(guò)添加輔助蛋白，增強(qiáng)了PrimeScriptⅡ RTase合成效率

短鏈和長(zhǎng)鏈cDNA合成均適用，背景少

PrimeScript RTase 在42℃下反應(yīng)能夠很好的合成cDNA。
以RNA Ladder（1、2、4.4、6.4、8.4、10、12kb）為模板，分別使用PrimeScript RTase及各公司反轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行1st strand cDNA合成，取一定量的cDNA進(jìn)行變性凝膠電泳后，SYBR GreenⅡ染色，再利用熒光圖像分析儀FMBIOⅡ進(jìn)行檢出。使用各公司推薦的反應(yīng)條件進(jìn)行反應(yīng)。
結(jié)果表明，PrimeScript RTase不僅能夠合成短鏈cDNA，也能合成長(zhǎng)鏈cDNA，且合成的cDNA背景很低，即可以合成全長(zhǎng)比例很高的高品質(zhì)cDNA。

（Takara Bio Inc.比較結(jié)果）

合成的cDNA準(zhǔn)確率高

反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)是多種實(shí)驗(yàn)的開(kāi)始，但這一環(huán)節(jié)的準(zhǔn)確性卻常常被忽視。
使用PrimeScript RTase和各公司的反轉(zhuǎn)錄酶，以人胎盤來(lái)源的total RNA 100 ng為模板，使用Oligo dT引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄；然后以得到的cDNA (相當(dāng)于RNA 5 ng) 為模板，用高保真酶PrimeSTAR HS擴(kuò)增TFR基因500 bp，進(jìn)行克隆。
經(jīng)測(cè)序確認(rèn)，以錯(cuò)誤堿基數(shù)在總堿基 (約20萬(wàn)個(gè)堿基) 中的比例作為錯(cuò)誤率，結(jié)果顯示，使用PrimeScript進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的準(zhǔn)確性最高。

（Takara Bio Inc.比較結(jié)果）

高級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA也可在42℃條件下擴(kuò)增

（Takara Bio Inc.比較結(jié)果）

非常適合Real Time PCR的PrimeScript RT系列

（Takara Bio Inc.比較結(jié)果）

通過(guò)添加輔助蛋白，增強(qiáng)了PrimeScriptⅡ RTase合成效率

PrimeSript II RTase是在PrimeScript RTase中添加輔助蛋白質(zhì)進(jìn)行改良，能夠很好的抑制cDNA合成的阻礙因素。
PrimeSript II RTase可以在42°C的反應(yīng)中獲得更高質(zhì)量的全長(zhǎng)cDNA合成產(chǎn)物，無(wú)需擔(dān)心RNA降解，特別是使用Oligo dT從Poly A開(kāi)始進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí)。
另外，由于抑制了反應(yīng)液配制時(shí)產(chǎn)生的錯(cuò)配引起的非特異性延伸反應(yīng)，因此，在反應(yīng)液配制后，即使冰上放置至反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)開(kāi)始，也不會(huì)發(fā)生阻礙cDNA合成。