| 如果病毒基因組為DNA，如非洲豬瘟病毒，無(wú)需反轉(zhuǎn)錄，只需要進(jìn)行探針?lè)ǖ膓PCR檢測(cè)。 Takara多種試劑，不同的特點(diǎn)，同樣的高效，根據(jù)需求選擇合適的高質(zhì)量試劑，事半功倍。 |
| 1) 經(jīng)典產(chǎn)品，被大量檢測(cè)機(jī)構(gòu)選擇——Premix Ex Taq™ (Probe qPCR)（Code No. RR390） |
| · 探針?lè)≒remix Type試劑，操作簡(jiǎn)單方便，可以快速、準(zhǔn)確地對(duì)目的基因進(jìn)行檢測(cè)、定量。 · DNA聚合酶使用了TaKaRa Ex Taq HS，可以進(jìn)行Hot Start法PCR反應(yīng)，再與Takara公司特別開(kāi)發(fā)的Buffer系統(tǒng)相結(jié)合，具有高擴(kuò)增效率、高擴(kuò)增靈敏度的特點(diǎn)。 · 在2X 濃度的Premix中，預(yù)先添加了耐熱性RNaseH (Tli RNaseH)，可以很好地抑制以cDNA作為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，由于cDNA中殘存mRNA對(duì)PCR反應(yīng)造成的阻害作用。 |
| 重點(diǎn)文獻(xiàn)推薦： |
| Teng, Q. et al. Development of a TaqMan MGB RT-PCR for the rapid detection of H3 subtype avian influenza virus
circulating in China. J. Virol. Methods 217, 64-69 (2015). RR390A用于H3禽流感病毒的高靈敏度且快速檢測(cè)。該方法是傳統(tǒng)qPCR方法的靈敏度1,000倍以上，可以檢測(cè)到10拷貝/反應(yīng)。 |
| Kim, H.-R. et al. Multiplex real-time polymerase chain reaction for the differential detection of porcine circovirus 2 and 3. J. Virol. Methods 250, 11-16 (2017). 使用RR390A建立了一種快速鑒別豬圓環(huán)病毒2型和3型的多重qPCR檢測(cè)方法?？梢愿哽`敏度、可重復(fù)地檢測(cè)低至50拷貝。批次內(nèi)及批次間差異小于4%。 |
| 2) 適用于快速反應(yīng)的增強(qiáng)版探針?lè)ㄔ噭?a href="http://grayarearadio.com/ProductShow.aspx?m=20141215102935390160&productID=20151117101030503605">Probe qPCR Mix（Code No. RR391） |
| · 增強(qiáng)了對(duì)PCR阻害物的抵抗性在進(jìn)行靶基因DNA檢測(cè)及基因分型時(shí)，受PCR反應(yīng)阻害物影響導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度下降及假陰性結(jié)果困擾的研究人員請(qǐng)一定嘗試使用！ · 適用于快速 qPCR反應(yīng)條件已證實(shí)使用各公司 qPCR儀均可以進(jìn)行良好的擴(kuò)增反應(yīng)。即使在反應(yīng)時(shí)間為40分鐘的快速PCR反應(yīng)條件下也可獲得重復(fù)性高的qPCR結(jié)果 |
| 使用同一master mix進(jìn)行單一和多重反應(yīng) |
物疫病/DNA-2.jpg) RR390A適用于單一和多重反應(yīng)。使用RR390A以小鼠cDNA為模板對(duì) 或 基因進(jìn)行檢測(cè)。在單一和多重反應(yīng)中Ct值相當(dāng)，表明RR390A適用于兩種實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ健?/span> |
Primer/probe：Applied Biosystems TaqMan Gene Expression Assays
模板：小鼠來(lái)源的cDNA（相當(dāng)于total RNA 1 pg～100 ng） qPCR儀器：Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System 小鼠肝臟來(lái)源的cDNA稀釋液作為模板，分別單獨(dú)檢測(cè)Gapdh和Ptprf基因，與multiplex qPCR進(jìn)行比較實(shí)驗(yàn)。 經(jīng)過(guò)確認(rèn)，multiplex qPCR與單獨(dú)檢測(cè)可獲得相同的定量結(jié)果。 |
| 實(shí)驗(yàn)例：各種PCR阻害物對(duì)Ct值的影響評(píng)價(jià) |
已知血紅素（血液成分）、腐植酸（土壤成分）、黑色素（皮膚和毛發(fā)成分）、單寧酸（植物成分）對(duì)PCR反應(yīng)有很強(qiáng)的阻害作用。
使用RR391和T公司試劑，比較無(wú)阻害物和添加阻害物體系的Ct值變化。 物疫病/DNA-3.jpg) ·體系中無(wú)阻害物時(shí)，RR391和T公司試劑得到的Ct值相近，產(chǎn)品性能相當(dāng)。
·體系中含有血紅素、腐植酸等阻害物時(shí)，無(wú)論模板濃度高低，使用RR391均可以獲得和無(wú)阻害物反應(yīng)接近的Ct值，說(shuō)明RR391對(duì)各種阻害物的抵抗性非常高。 ·而使用T公司同類產(chǎn)品時(shí)，體系中含有血紅素和單寧酸時(shí)，無(wú)論模板濃度高低，都無(wú)法被檢出。體系中含有腐植酸和黑色素時(shí)，Ct值普遍滯后，尤其當(dāng)模板濃度較低時(shí)，無(wú)法檢出，檢測(cè)靈敏度下降。 |
頁(yè)面更新：2022-08-23 11:56:30
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