本制品以含有T7啟動(dòng)子序列的雙鏈DNA為模板，以NTPs為底物，轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子下游區(qū)域，合成與模板互補(bǔ)的單鏈RNA。與附帶的buffer一起用于體外轉(zhuǎn)錄 (IVT) 反應(yīng)時(shí)，可以大量制備高質(zhì)量的RNA。
本制品是T7 RNA Polymerase（Code No. 2540A/B）的升級(jí)產(chǎn)品，每個(gè)反應(yīng)（20 μl體系）的RNA合成量提高約7倍（圖1），性能更強(qiáng)！ |
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| 圖 1. 本制品與舊產(chǎn)品合成 FLuc RNA（約 1.9 kb）時(shí)的產(chǎn)量比較（20 μl 體系） |
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| * 典型的 T7 啟動(dòng)子序列和轉(zhuǎn)錄起點(diǎn) |
| 為 IVT 反應(yīng)制備模板 DNA 的典型 T7 啟動(dòng)子序列如下所示。將轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)（+1 位置）的堿基設(shè)置為“G”對(duì)于高效的 RNA 合成很重要，但需要根據(jù)要合成的RNA序列和用于5′-cap修飾的Cap類(lèi)似物的特點(diǎn)來(lái)設(shè)計(jì)模板，所以要根據(jù)目的準(zhǔn)備模板DNA。 |
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| ■ 保存 |
| －20℃ |
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| ■ 起源 |
| Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase. |
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| ■ 性質(zhì) |
1. 分子量：約99 kDa
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輔因子：Mg2+ |
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| ■ 活性定義 |
| 在 37℃，1 小時(shí)內(nèi)使 1 nmol [3H] GMP 摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位（unit)。 |
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| ■ 用途 |
1. 使用 Cap 類(lèi)似物合成帶帽的 mRNA
2. 長(zhǎng)鏈非編碼 RNA 的合成
3. guide RNA 的合成
4. siRNA前體的合成
5. 用于 RT-qPCR 的 RNA 標(biāo)準(zhǔn)模板的合成
6. 高標(biāo)記RNA 探針的合成
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| ■ 使用注意 |
1. 酶不要?jiǎng)×覕嚢琛?br />
2. 當(dāng) dsDNA 模板、試劑、試管或微量移液器吸頭被 RNase 污染時(shí)，合成的 RNA 的產(chǎn)量會(huì)降低或者出現(xiàn)片段化。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)采取預(yù)防措施以避免 RNase 污染，例如戴一次性手套和使用專(zhuān)門(mén)用于 RNA 實(shí)驗(yàn)的試管和微量移液器吸頭。
3. 為了合成長(zhǎng)度一致的RNA，通常使用線(xiàn)性dsDNA（例如線(xiàn)性化質(zhì)粒和 PCR 產(chǎn)物）用于體外轉(zhuǎn)錄。有報(bào)道稱(chēng)，模板DNA末端應(yīng)為5’-突出或平端，以避免出現(xiàn)非特異性產(chǎn)物。
4. 緩沖液中的亞精胺會(huì)與核酸形成復(fù)合物并可能產(chǎn)生沉淀，因此模板 DNA 應(yīng)在加酶之前即倒數(shù)第二步再加入反應(yīng)體系中。
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