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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

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Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說明書 數(shù)量
Takara 6141 Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System 1 Kit ￥4,973
 
一款合成高質(zhì)量、高產(chǎn)量mRNA的體外轉(zhuǎn)錄（IVT）試劑盒
·通過體外轉(zhuǎn)錄（IVT）合成帶有Cap結(jié)構(gòu)和Poly(A)序列的mRNA；※ Cap類似物不包含在本產(chǎn)品中
 ·優(yōu)化的T7 RNA聚合酶用于IVT反應(yīng)，RNA合成效率高、產(chǎn)量大；
·獨(dú)立包裝的NTPs，方便修飾NTPs替換，且不影響mRNA產(chǎn)量；
·采用In-Fusion無縫克隆，輕松構(gòu)建模板質(zhì)粒DNA；
·使用氯化鋰（LiCl）溶液進(jìn)行RNA純化，可立即進(jìn)行下游應(yīng)用。
 
■ 制品說明
Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System是能夠簡便、高效合成帶有Cap結(jié)構(gòu)和Poly(A)序列的mRNA的體外轉(zhuǎn)錄試劑盒。它包含以下兩種制品：
① Cloning Kit for mRNA Template（Code No. 6143）：
本試劑盒用于將模板DNA無縫克隆到預(yù)線性化載體（包含在本試劑盒中）中構(gòu)建用于體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的模板質(zhì)粒。預(yù)線性化載體中包含T7 啟動子、轉(zhuǎn)錄起始序列 (AGG)、5'-UTR（非編碼區(qū)）、3'-UTR、和105-base Poly(A) 序列。試劑盒還包含用于將目標(biāo)DNA無縫克隆到預(yù)線性化載體的In-Fusion Snap Assembly Master Mix和FLuc對照片段（包括15 bp，3' In-Fusion sequence；FLuc CDS；和15 bp，5' In-Fusion sequence）。
 
② Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit（Code No. 6144）：
本試劑盒以含有 T7 啟動子序列的雙鏈 DNA 為模板，使用優(yōu)化的高效T7 RNA聚合酶，通過體外轉(zhuǎn)錄可合成大量mRNA。除此以外，還包含用于IVT反應(yīng)后消化模板DNA的DNase I和用于純化mRNA的氯化鋰 (LiCl) 溶液。真核細(xì)胞翻譯蛋白質(zhì)需要RNA的5'端有Cap結(jié)構(gòu)，本試劑盒配合使用CleanCap Reagent AG（TriLink公司的Cap類似物）可以高效制備具有Cap結(jié)構(gòu)的mRNA。另外，試劑盒包含單獨(dú)的NTPs，方便優(yōu)化或使用修飾NTPs如假尿苷替換，而且不會明顯降低mRNA的產(chǎn)量。使用本產(chǎn)品，每次反應(yīng)（20 μl 反應(yīng)體系）可以合成高達(dá) 200μg 或更多的RNA。可以根據(jù)需要放大反應(yīng)體系，即使使用10倍（200μl）反應(yīng)體系也不影響mRNA預(yù)期產(chǎn)量（請參考說明書實(shí)驗(yàn)例）?！鵆ap類似物不包含在本產(chǎn)品中，請另外準(zhǔn)備CleanCap Reagent AG (TriLink公司)。
 
 
使用Takara IVTpro™ 系統(tǒng)合成 mRNA時，通過In-Fusion方法克隆目標(biāo)基因（GOI）后，使用不會在 Poly (A) 下游留下額外序列的限制性內(nèi)切酶切割是非常重要的。強(qiáng)烈建議使用 Hind III（Code No. 1060A/B）對用于mRNA合成的質(zhì)粒進(jìn)行線性化（請參考說明書和載體圖譜信息）。
 
■ 用途
· 用于體外轉(zhuǎn)錄（IVT）模板質(zhì)粒DNA的構(gòu)建
· 配合使用TriLink公司的CleanCap Reagent AG體外轉(zhuǎn)錄合成mRNA
· 使用其它Cap類似物如Anti-Reverse Cap Analog (ARCA)合成帶帽結(jié)構(gòu)的mRNA
(* 請注意，使用ARCA時，需要設(shè)計(jì)與本產(chǎn)品不同的模板序列。)
· 用于長鏈非編碼RNA（Long non-coding RNA）的合成
· 向?qū)NA（guide RNA）的合成
· siRNA前體的合成
· 用于RT-qPCR的RNA標(biāo)準(zhǔn)模板的合成
· RNA探針的合成
 
■ 制品內(nèi)容（6141、6144 ）
Cloning Kit for mRNA Template（Code No. 6143）（10次反應(yīng)）
 
產(chǎn)品組分 體積量 件數(shù)/Kit
1. Linearized Template Vector (50 ng/μl)  10 μl 1
2. FLuc Control Fragment (100 ng/μl) ＊1  10 μl 1
3. 5X In-Fusion Snap Assembly Master Mix  20 μl 1
 
*1：由 In-Fusion 序列 (15 bp) + FLuc-CDS + In-Fusion 序列 (15 bp) 組成的對照片段 (1,683 bp)
 
Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit（Code No. 6144）（20次量、20 μl反應(yīng)體系）
 
產(chǎn)品組分 體積量 件數(shù)/Kit
1. 10X Transcription Buffer  40 μl 1
2. 10X ATP  40 μl 1
3. 10X CTP  40 μl 1
4. 10X GTP  40 μl 1
5. 10X UTP  40 μl 1
6. 10X Enzyme Mix  40 μl 1
7. Nuclease-Free Water  1 ml 3
8. DNase I  80 μl 1
9. Lithium Chloride Precipitation Solution  600 μl 1
10. Positive Control Template (FLuc) (0.5 μg/μl)＊2  10 μl 1
 
*2：由T7 啟動子 + 5'UTR + FLuc-CDS + 3'UTR + Poly (A) 序列組成的線性質(zhì)粒DNA。
 
■ 實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)
· 本制品是通過IVT反應(yīng)合成RNA的試劑。如果雙鏈DNA模板、試劑、試管、微量移液器吸頭或反應(yīng)中使用的其他材料混入RNase污染，會導(dǎo)致使用本試劑盒獲得的RNA收量降低或片段化。在反應(yīng)中使用專用試管和微量移液器吸頭，并戴上新的一次性手套以防止RNase污染。
· 10X Enzyme Mix 不要劇烈攪拌。
· 使用前將Lithium Chloride Precipitation Solution在室溫下融化。融解后，如果充分混合后仍可見沉淀，可37℃保溫溶解。如果仍有沉淀物，請直接使用，對性能沒有影響。
 
■ 保存
-20℃
 
■ 試劑盒以外的其它必要試劑（主要試劑）
· CleanCap Reagent AG（TriLink公司）
· 修飾NTPs
· 限制酶（Hind III等等）
 
■ 序列信息 FLuc Control Fragment
序列信息（fasta格式）：點(diǎn)此進(jìn)行下載
該序列與Positive Control Template（FLuc）中2,685～4,367（1,683 bp）的序列相同。
 
■ 序列信息 Linearized Template Vector
序列信息（fasta格式）：點(diǎn)此進(jìn)行下載
Linearized Template Vector（2,921 bp）
 
 
NeoR/KanR: 53～847
Ori: 1,172～1,760
CMV enhancer: 1,861～2,240
CMV promoter: 2,241～2,444
 
T7 promoter sequence: 2,489～2,505
Transcription start sequence (AGG): 2,506～2,508
5’UTR: 2,509～2,559
Upstream In-Fusion region (15 bp): 2,545～2,559
 
In-Fusion cloning site (linearized site): between 2,559 and 2,560
 
Downstream In-Fusion region (15 bp): 2,560～2,574
3’UTR: 2,560～2,672
Poly(A)105: 2,673～2,777
Restriction enzyme sites for plasmid linearization: 2,776～2,801(Hind III, Xho I, Sal I, Avr II, BamH I)
 
Poly(A) Forward Primer: 2,570～2,589
Poly(A) Reverse Primer: 2,863～2,882
 
<T7啟動子后序列的詳細(xì)信息>
 
■ 載體信息 Positive Control Template（FLuc）
序列信息（fasta格式）：點(diǎn)此進(jìn)行下載
 
Positive Control Template（FLuc）（4,574 bp）
 
NeoR/KanR: 193～987
Ori: 1,312～1,900
CMV enhancer: 2,001～2,380
CMV promoter: 2,381～2,584
 
T7 promoter sequence: 2,629～2,645
Transcription Start Sequence (AGG): 2,646～2,648
5’UTR: 2,649～2,699
FLuc CDS: 2,700～4,352
3’UTR: 4,353～4,465
Poly(A)105: 4,466～4,570 (FLuc Control Fragment-derived sequence: 2,685～4,367)
 
Linearized site by Hind III (5' overhangs) : 4,569 (4,573)
 
＜T7啟動子后序列的詳細(xì)信息＞
 
 

頁面更新：2025-01-22 16:20:55