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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

Q-1：選擇In-Fusion的理由是什么？: A-1：
In-Fusion Cloning Kits不依賴于連接酶，可以在任意線性化載體的任意位點(diǎn)定向插入PCR產(chǎn)物。
In-Fusion是簡(jiǎn)單快速單管操作的克隆方法。

Q-2：In-Fusion酶作用機(jī)理是什么？: A-2：
根據(jù)In-Fusion酶特殊的性質(zhì)，插入片段和載體在同源序列 (15個(gè)堿基)處融合。這與一般的同源重
組是有差異的，因此克隆不再有位置和空間的限制。

Q-3：In-Fusion HD Cloning System和原始的In-Fusion PCR Cloning System有什么不同？: A-3：
   在保留原始In-Fusion PCR Cloning System的所有優(yōu)點(diǎn)之外，In-Fusion HD Cloning System
   包含更為粗放型的In-Fusion酶，可以有效提高克隆效率，尤其是長(zhǎng)片段、短寡核苷酸鏈和多片段
   克隆。另外升級(jí)后In-Fusion酶不再需要稀釋處理即可方便地儲(chǔ)存在-20℃。EcoDry^™凍干粉形式產(chǎn)
   品可以儲(chǔ)存在室溫條件下。

Q-5：載體和插入的DNA片段末端結(jié)構(gòu)有限制嗎？: A-5：
沒(méi)有特別的限制。無(wú)論是平滑末端、粘性末端或者末端有無(wú)A尾均可進(jìn)行有效的連接反應(yīng)。

Q-6：使用In-Fusion是否需要獲得專(zhuān)利許可？: A-6：
如果盈利單位是用于基礎(chǔ)研究，不需要取得專(zhuān)利許可。目前本試劑盒已經(jīng)受到很多企業(yè)和研究人員
的青睞。

Q-7：In-Fusion克隆技術(shù)會(huì)導(dǎo)入序列錯(cuò)誤嗎？: A-7：
   Clontech目前還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)采用In-Fusion酶會(huì)發(fā)生堿基滑動(dòng)、堿基添加、堿基缺失的現(xiàn)象。我們克隆
   了超過(guò)4,000個(gè)克隆子并對(duì)其進(jìn)行了測(cè)序，這4,000個(gè)克隆子包含了多種人類(lèi)開(kāi)放讀碼框，在克隆連
   接位點(diǎn)上幾乎沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何錯(cuò)誤（<2%）。目前發(fā)現(xiàn)的序列錯(cuò)誤大部分都是由于錯(cuò)誤的引物合成所
   引起的（也就是說(shuō)，序列錯(cuò)誤出現(xiàn)在所有或者多數(shù)克隆包含一個(gè)特定的插入片段的情況下）。
   In-Fusion是實(shí)現(xiàn)無(wú)錯(cuò)融合構(gòu)建的理想選擇。

Q-8：In-Fusion克隆技術(shù)可以在單次反應(yīng)中克隆多重片段嗎？: A-8：
   In-Fusion可以進(jìn)行多重片段的克隆并且已證實(shí)非常有效(Zhu et. Al., 2007)。這個(gè)過(guò)程明顯比將多
   個(gè)片段克隆到同一載體的其他方法速度要快（比如，這是一個(gè)多重載體修飾的有效方法）?？寺〔?br />    作可以一步完成。需要注意的是多重片段克隆效率無(wú)疑要低于單片段克隆效率。因此，您可以通過(guò)
   篩選更多的克隆來(lái)獲得目標(biāo)產(chǎn)物。以下是采用In-Fusion進(jìn)行此類(lèi)實(shí)驗(yàn)的參考文獻(xiàn)：
   · Fujiwara, K. et al. (2005) J. Biol. Chem. 280(69):33,645–33,651.
   · Zhu, B. et al. (2007) BioTechniques 43(3):354– 359.

頁(yè)面更新：2019-05-31 16:06:24