欧美成 人版在线_久久免视看国产_亚洲成l人在线观看线路_久久96热在精品国产网站

我們使用cookie改善您的瀏覽體驗(yàn)并提供有意義的內(nèi)容。請閱讀我們的cookie協(xié)議
收藏我們 在線訂購 CoA查詢
     

機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

Q-1：采用超過操作手冊推薦的的In-Fusion反應(yīng)液用量轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞可以獲得更多的克隆嗎？
A-1：

   答案是否定的。大量的In-Fusion酶對(duì)于某些大腸桿菌菌株來說是有毒性作用的，因此不建議采用超
   過推薦用量來轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞。如果需要更多的克隆，我們建議進(jìn)行多重轉(zhuǎn)化。

Q-2：在單次In-Fusion反應(yīng)中，陰性對(duì)照可以獲得多少克??？
A-2：

   試劑盒中提供的陰性對(duì)照通常會(huì)產(chǎn)生少于5個(gè)的藍(lán)斑；白斑的數(shù)量根據(jù)使用菌株的不同而有所不同。
   通常情況下，實(shí)驗(yàn)組平板上背景比例大概不到5%。我們猜測背景是由于細(xì)胞自身的重組功能所產(chǎn)
   生的，某些E.coli菌株（即使是recA1突變的菌株）也可以產(chǎn)生低水平的同源重組事件（遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于
   In-Fusion酶的重組概率）。這與我們觀察到的實(shí)驗(yàn)平板上98%的克隆是正確的這一點(diǎn)是一致的。

Q-3：如何提高轉(zhuǎn)化效率和整體克隆效率？
A-3：

  • 采用轉(zhuǎn)化效率超過108 cfu/μg的高效感受態(tài)細(xì)胞。大多數(shù)自制的感受態(tài)細(xì)胞效率相對(duì)較低，尤其
    是使用前儲(chǔ)存過一段時(shí)間的感受態(tài)細(xì)胞。我們推薦采用針對(duì)In-Fusion優(yōu)化的Stellar™ Competent
    Cells (Code No. 636763)。
  • 擴(kuò)增后的PCR片段必須經(jīng)過純化操作以去除dNTPs。
  • 如果您使用的不是商業(yè)化的純化試劑盒，膠純化后應(yīng)該進(jìn)行酚氯仿抽提以移除雜質(zhì)。
  • 合成高質(zhì)量的引物確保同源序列部分是正確的。

Q-4：In-Fusion克隆不建議使用的感受態(tài)細(xì)胞有哪些？
A-4：

   不推薦使用的感受態(tài)細(xì)胞為TOP10或者其衍生類細(xì)胞（比如ccdB Survival™ 2 T1R E. coli），
   以及其它相關(guān)菌株（DH10B, MC1061）。原因是在這些細(xì)胞中In-Fusion連接產(chǎn)物可能存在不穩(wěn)定
   性（或者可能發(fā)生基因重排）。同樣，其他不適用于不穩(wěn)定DNA克隆的感受態(tài)細(xì)胞也不推薦使用。

頁面更新：2015-01-06 10:23:35