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機構用戶解決方案

Q-1：酵母單雜交bait在設計上有什么要求？: A-1：
   在設計酵母單雜交bait時需要考慮兩點：順式作用元件（cis-acting element）和啟動子序列。
   ①使用cis-acting元件：
    ■ 使用最少數(shù)量的cis-acting元件，cis-acting元件超過20bp時會增加非特異性結合。Clontech
       檢測的最長的單拷貝cis-acting元件為20bp。
    ■ 如果你的cis-acting元件超過100bp，使用1個或2個拷貝。需要注意的是這么長的片段會提高假
       陽性。
   ②使用啟動子序列：
    ■ bait中不要包含TATA box。
    ■ 拷貝數(shù)：如果啟動子序列小于100 bp，使用2個拷貝作為bait。如果超過100 bp，使用1個拷貝
       作為bait。
    ■ 檢測假陽性：構建好bait菌株后，檢測報告基因的本底表達，以確認任何非特異報告基因激活
       （參考操作手冊）。

Q-2：pAbAi空載體可以作為陰性對照使用嗎？: A-2：
   pAbAi空載的多克隆位點中Sma I和Xho I之間存在隱蔽的啟動子，這個MCS可以被某些酵母體內蛋白
   識別。如果這段識別序列是完整的，pAbAi載體會表現(xiàn)出自激活活性。因此，我們推薦退火后的核苷
   酸（插入片段）的3’端帶有Sal I了或Xho I酶切位點，而5’端可以是MCS中Sma I位點上游的任意的
   單一酶切位點。同時，推薦采用mutant bait做為陰性對照。

頁面更新：2015-01-14 11:19:11