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機構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

Q-1：使用3’RACE試劑盒時，RT-PCR反應后，無PCR產(chǎn)物或出現(xiàn)Smear，怎么辦?
A-1：

首先請按說明書要求進行Control反應，如果Control反應情況正常，那說明實驗操作沒有問題。此時請從提取的RNA樣品的純度和添加量、基因的表達豐度、基因的長度和GC含量、引物的設(shè)計情況、參考文獻的可信度以及RT-PCR條件的設(shè)定等方面加以考慮；如果Control反應不正常，應從實驗操作的準確性以及實驗器具處理等方面進行考慮。

Q-2：使用3’RACE試劑盒時，RT反應后的Outer PCR反應體系中不加dNTP Mixture，為什么?
A-2：

在1×cDNA Dilution Buffer II和RT反應液中均含有dNTP Mixture，可以足夠滿足PCR反應的需要，所以不需再添加dNTP Mixture。

Q-3：使用3’RACE試劑盒時，3’RACE PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)電泳分析后，有時為什么不是單一條帶?
A-3：

不是單一條帶的可能原因如下：
1．可能是因為mRNA不同的拼接方式造成的；
2．可能是因為多種Poly(A)+位點的存在造成的；
3．可能是因為擴增的基因為多基因家族的成員；
4．可能是因為未知序列信息不清楚導致了非特異性擴增。

Q-4：使用3’RACE試劑盒時，PCR反應中，反轉(zhuǎn)錄反應液的使用量多少較為合適?
A-4：

反轉(zhuǎn)錄反應液的使用量可控制在0.5 μl～10 μl的范圍。

頁面更新：2020-04-26 14:46:31