使用本試劑盒要特別注意干燥步驟。因?yàn)樵摲椒ㄌ崛〉腄NA較大，完整性好，所以請(qǐng)一定不要干燥過(guò)度。Tube中看不到有明顯的液體或沒(méi)有乙醇?xì)馕逗?，就可以加入TE Buffer進(jìn)行溶解。如果沉淀已經(jīng)變白，說(shuō)明干燥過(guò)度，此時(shí)加入TE Buffer，可能沉淀不能完全溶解，DNA的收量可能會(huì)受到影響。
本試劑盒適合于動(dòng)物組織、一般植物材料、全血、培養(yǎng)細(xì)胞、革蘭氏陰性菌的基因組DNA提取?；蚪MDNA的提取量根據(jù)組織材料的不同而各異，一般情況下，從10 mg的肝臟組織中，可以提取約5 μg的基因組DNA；從100 mg的菠菜中，可以提取約5 μg的基因組DNA；從100 μl的人全血中，可以提取約0.5 μg的基因組DNA；從2.0E+06的培養(yǎng)細(xì)胞中，可以提取約10 μg的基因組DNA；從2.0E+09的E.coli細(xì)胞中，可以提取約10 μg的基因組DNA。
基因組DNA收量較低時(shí)，可以從以下幾個(gè)方面考慮：
① 實(shí)驗(yàn)材料量太少，比如從2×103培養(yǎng)細(xì)胞中提取的基因組DNA就不能用電泳檢測(cè)到；
② 裂解不充分，DNA未充分釋放，建議要延長(zhǎng)裂解時(shí)間（過(guò)夜裂解）或增加裂解液的量；
③ 提取的組織材料中基因組DNA含量較少，適當(dāng)增加起始組織量；
④ 起始組織量過(guò)大，裂解困難，按比例適當(dāng)增加裂解液的加量或分成多份進(jìn)行提取；
⑤ 洗脫時(shí)將滅菌蒸餾水或Elution Buffer加熱至65℃后使用將有利于提高洗脫效率；
⑥ 請(qǐng)嚴(yán)格按照操作方法進(jìn)行操作。
① 選取的實(shí)驗(yàn)材料不夠新鮮，采集后的組織材料未及時(shí)處理或未低溫保存。我們建議材料應(yīng)盡量在-80℃保存，運(yùn)輸過(guò)程中亦應(yīng)使用干冰等。
② 材料本身有殘留的DNA酶活性?？梢栽黾右淮蜝uffer WA的清洗操作。
① 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中沒(méi)有使用RNase A。應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)操作要求使用RNase A。
② RNase A可能失活。RNase A盡可能在-20℃下保存，RNase A活性比較穩(wěn)定，一般不易失活。
① 提取的基因組DNA中鹽份濃度過(guò)高。在使用Buffer WA和Buffer WB進(jìn)行DNA制備膜的清洗時(shí)，請(qǐng)沿Spin Column的管壁四周加入，且加入Buffer WB后室溫靜置5分鐘，有助于徹底清洗掉Column上殘留的鹽離子，這樣有利于提高清洗效果。
② 洗脫液中殘留乙醇，在向Column中加入洗脫液之前，將Column在室溫下靜置2分鐘有助于使Column上殘留的乙醇徹底揮發(fā)，然后再加入洗脫液洗脫。
③ 進(jìn)行DNA洗脫時(shí)請(qǐng)一定在膜的中央加入洗脫液，盡量不要沾染Spin Column的管壁四周。
本試劑盒主要用于小量基因組DNA的制備，當(dāng)實(shí)驗(yàn)材料量超出說(shuō)明書(shū)的要求用量時(shí)，可以加大Buffer GL或Buffer GB的用量，裂解后分到兩個(gè)Collection Tube中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。起始組織量最好控制在規(guī)定范圍內(nèi)，可以分幾份進(jìn)行，否則起始量過(guò)大會(huì)影響裂解和收量，如果裂解不充分會(huì)堵塞柱子，造成實(shí)驗(yàn)失敗。
有的深加工品材料本身DNA含量非常少，并且加工之后導(dǎo)致DNA斷裂，所以電泳時(shí)可能檢測(cè)不到明顯的DNA條帶，可以直接進(jìn)行PCR檢測(cè)。
頁(yè)面更新：2020-04-29 11:42:46
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