本試劑盒適合于植物材料基因組DNA的提取?;蚪MDNA的提取量因材料不同而各異,一般情況下,從100 mg的植物材料中,可以提取約1~10 μg的基因組DNA。植物材料的DNA含量一般較低,尤其是含水分較多的植物果實(shí)及生長狀況較老的葉片。幼嫩的植物葉苗及植物種子中基因組DNA含量相對豐富,且植物的DNA含量和植物的生長狀態(tài)有很大關(guān)系,如果想要獲得高品質(zhì)的DNA請使用幼嫩的植物材料,否則可能得不到完整的DNA。
基因組DNA收量較低時,可以從以下幾個方面考慮:
1.實(shí)驗(yàn)材料本身DNA含量低,比如從100 mg蘋果果肉中僅能提取得到約幾十納克的基因組DNA;
2.液氮研磨不充分,DNA未充分釋放。植物材料是需要進(jìn)行液氮研磨的,所以充分的液氮研磨是獲得高品質(zhì)DNA的關(guān)鍵;
3.選材不當(dāng),處于生長中期或末期的植物材料DNA含量較低,甚至是不完整的DNA;
4.洗脫時將滅菌蒸餾水或Elution Buffer加熱至65℃后使用將有利于提高洗脫效率;
5.請嚴(yán)格按照操作方法進(jìn)行操作。
1.材料不夠新鮮,收集后的材料未及時處理或未低溫保存。我們建議材料應(yīng)盡量在-80℃保存,運(yùn)輸過程中亦應(yīng)使用干冰等。
2.材料本身有殘留的DNA酶活性。可以增加一次Buffer WA的清洗操作。
3.如需長期保存提取的DNA,請使用Elution Buffer洗脫。
1.實(shí)驗(yàn)過程中沒有使用RNase A。應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)操作要求使用RNase A。
2.RNase A可能失活。RNase A盡可能在-20℃下保存,RNase A活性比較穩(wěn)定,一般不易失活。
1.提取的基因組DNA中鹽份濃度過高。在使用Buffer WA和Buffer WB進(jìn)行DNA制備膜的清洗時,請沿Spin Column的管壁四周加入,有助于徹底清洗掉Column上殘留的鹽離子,這樣有利于提高清洗效果。
2.洗脫液中殘留乙醇,在向Spin Column中加入洗脫液之前,將Spin Column在室溫下靜置2分鐘有助于使Spin Column上殘留的乙醇徹底揮發(fā),然后再加入洗脫液洗脫。
3.進(jìn)行DNA洗脫時請一定在膜的中央加入洗脫液,盡量不要沾染Spin Column的管壁四周。
頁面更新:2020-04-29 14:44:36