可以參考以下建議進行改善:
1.由于植物組織的不同,基因組DNA回收量會有所不同,請增加初始組織量。
2.松、山茶等固體葉片可以使用液氮研磨后再提取基因組DNA。
3.使用Microtube用研磨棒代替Pipet Tip進行按壓處理可能會提高收量。
4.添加異丙醇或者70%乙醇后的離心時間延長(添加異丙醇后的離心時間10分鐘→30分鐘、添加70%乙醇后的離心時間3分鐘→30分鐘等),可能會提高收量。
5.根據(jù)植物組織的保存時間、保存條件的不同,基因組DNA收量會有所不同,請盡量使用新鮮樣品。
可以參考以下建議進行改善:
1.有時回收的基因組DNA溶液中含有PCR反應的阻害物質(zhì),請將基因組DNA溶液進行稀釋后再作為PCR反應的模板使用。
2.初始組織量太多,請減少初始組織量。
3.基因組DNA溶液呈茶褐色時,可能混入了明膠類物質(zhì),使用High-Salt Solution for Precipitation(Plant)(Code No. 9193)處理可能將緩和對PCR反應的阻害。使用High-Salt Solution for Precipitation(Plant)處理基因組DNA樣品時,操作方法與處理RNA樣品相同。但是不含PCR反應阻害物質(zhì)的樣品如果使用High-Salt Solution for Precipitation(Plant)處理后,相反有可能會引起對PCR反應的阻害,請注意!
4.PCR反應用酶選擇TaKaRa Ex Taq® Hot Start Version(Code No. RR006)。
使用本產(chǎn)品時,有可能存在RNA污染,此時推薦使用RNase處理。
RNase處理方法:
1、向DNA溶液中加入終濃度為10-20 μg/ml的RNase A*
2、37℃保溫30分鐘
3、如有必要,可用酚/氯仿抽提。
*:RNase A粉末需用10 mM Tris-HCl pH7.5和15 mM NaCl配置成1 mg/ml的溶液。若含有DNase,100℃加熱15分鐘使DNase失活(無DNase的RNase A溶液可購買)。
頁面更新:2020-04-29 15:17:35