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當(dāng)前位置：首頁(yè) > 技術(shù)資料 > 相關(guān)問(wèn)答 > Takara > 核酸提取純化及DNA標(biāo)記 > Lysis Buffer for Microorganism to Direct PCR
Q-1：PCR擴(kuò)增沒(méi)有產(chǎn)物，原因有哪些?
A-1：

原因可能有以下幾點(diǎn)：
1．挑取的菌量過(guò)多。當(dāng)菌體成份較為復(fù)雜時(shí)，挑取的菌量過(guò)多會(huì)抑制PCR反應(yīng)。使用牙簽或槍頭挑取菌落時(shí)建議蘸到即可，不可挑取太多。
2．挑取的菌量過(guò)少。菌量過(guò)少，模板DNA量少，PCR就會(huì)檢測(cè)不到。關(guān)于菌量的挑取請(qǐng)參見(jiàn)“注意事項(xiàng)”部分。
3．使用的菌落或菌絲不夠新鮮。菌體存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，使用本試劑將難以裂解，最好選取新鮮培養(yǎng)的菌體。
4．PCR反應(yīng)時(shí)，加入裂解液的體積過(guò)大，超出PCR反應(yīng)體系的1/10，建議加入裂解液的體積為反應(yīng)體系的1/10以下。

Q-2：可以使用微量移液器反復(fù)吹打替代本試劑進(jìn)行裂解嗎?
A-2：

不可以。酵母等細(xì)胞壁較厚，用微量移液器反復(fù)吹打起不到破碎作用，PCR檢測(cè)假陰性的可能性較大。

Q-3：用于PCR反應(yīng)的裂解液的加量多少為宜?
A-3：

實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，裂解上清液占PCR反應(yīng)體系的1/20～1/10都可以有效地?cái)U(kuò)增出目的條帶。但如果上清液的體積超過(guò)PCR反應(yīng)體系的1/10，會(huì)影響PCR擴(kuò)增效果。

Q-4：延長(zhǎng)裂解時(shí)間、提高裂解溫度對(duì)實(shí)驗(yàn)會(huì)有影響嗎?
A-4：

本說(shuō)明書(shū)中提供的裂解時(shí)間和裂解溫度都是經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的最佳條件，我們建議不要更改裂解時(shí)間和裂解溫度。

Q-5：本試劑是否對(duì)所有微生物都能有效裂解?
A-5：

本試劑是一種廣譜的微生物裂解液，可以裂解大多數(shù)的微生物菌體直接進(jìn)行PCR檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)革蘭氏陰性菌，本試劑具有良好的裂解效果；對(duì)于大部分革蘭氏陽(yáng)性菌以及真菌等細(xì)胞壁較厚、成份較復(fù)雜的菌體也能裂解。但對(duì)于極少部分微生物（如放線菌），本試劑不能有效裂解。
本試劑能夠裂解的微生物的菌種名稱(chēng)見(jiàn)附表，不在其中的菌種本試劑不承諾能夠有效裂解。

Q-6：經(jīng)本試劑裂解得到的DNA可否用于電泳檢測(cè)或限制酶切等反應(yīng)?
A-6：

經(jīng)本試劑裂解得到的DNA含量極少，只能夠用于PCR擴(kuò)增反應(yīng)，不適用于電泳檢測(cè)或限制酶切等反應(yīng)，利用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)不到基因組DNA。

Q-7：經(jīng)本試劑裂解得到的上清液是否適用于所有PCR反應(yīng)體系?
A-7：

經(jīng)驗(yàn)證，裂解上清液適用于TaKaRa Ex Taq®、TaKaRa LA Taq®以及Premix Taq™ (Ex Taq™ Version 2.0)的反應(yīng)體系，其它PCR反應(yīng)體系未進(jìn)行評(píng)價(jià)，不承諾一定能夠進(jìn)行有效擴(kuò)增。

頁(yè)面更新：2020-04-29 15:22:50