如果使用該試劑盒出現(xiàn) RNA Spin Column堵塞現(xiàn)象，原因可能有以下幾種：
1．樣品裂解不充分。樣品裂解不充分會導致RNA Spin Column的堵塞。關(guān)于組織或細胞的裂解請參見操作方法中的組織或細胞的裂解。難裂解的組織建議使用液氮研磨的方法進行裂解。
2．樣品起始量過多。樣品量過多會造成核酸量過多而發(fā)生堵塞現(xiàn)象。使用該試劑盒提取的組織或細胞的最佳起始量，請參考“不同組織的最佳起始量和裂解Buffer RL使用量”。
3．離心溫度過低。使用該試劑盒進行RNA提取時，如無特殊說明均在室溫（20～25℃）下進行。溫度過高或過低都會對RNA Spin Column造成影響，發(fā)生堵塞現(xiàn)象。
對于基因組含量較高或者樣品起始量較大時，請不要使用gDNA Eraser Spin Coumn，以免gDNA Eraser Spin Column 發(fā)生堵塞。如果樣品量較少或基因組含量較少也發(fā)生堵塞現(xiàn)象，則可能的原因是：
1．樣品裂解不充分。樣品裂解不充分會導致Column的堵塞。關(guān)于組織或細胞的裂解請參見操作方法中的組織或細胞的裂解。難裂解的組織建議使用液氮研磨的方法進行裂解。
2．樣品起始量過多。樣品量過多會造成核酸量過多而發(fā)生堵塞現(xiàn)象。使用該試劑盒提取的組織或細胞的最佳起始量，請參考“不同組織的最佳起始量和裂解Buffer RL使用量”。
3．離心溫度過低。使用該試劑盒進行RNA提取時，如無特殊說明均在室溫（20～25℃）下進行。離心轉(zhuǎn)數(shù)過低。如發(fā)生堵塞的現(xiàn)象，可以加大離心轉(zhuǎn)數(shù)以及離心時間。
如果 gDNA Eraser Spin Column 發(fā)生堵塞，則：
1．將樣品吸出后直接進行后續(xù)實驗。
2．增加離心次數(shù)和時間。
3．增大離心轉(zhuǎn)數(shù)。
4．如果是基因組較多或起始量較大，不要進行g(shù)DNA Eraser Spin Column的過濾。
使用該試劑盒提取的組織或細胞的收量請參考“不同組織的RNA提取量”。如果RNA的收量過低，則可能有以下幾種原因：
1．樣品裂解不充分。樣品的充分裂解是使用該試劑盒提取高質(zhì)量RNA的關(guān)鍵。關(guān)于樣品的裂解請參考操作方法中的組織或細胞的裂解。
2．樣品起始量過多。使用該試劑盒提取的組織或細胞的最佳起始量，請參考“不同組織的最佳起始量和裂解Buffer RL使用量”。
3．RNA洗脫不充分。建議重復洗脫RNA一次。洗脫時可以將RNase Free dH2O或0.1% DEPC dH2O在RNA Spin Column 中的靜置時間延長至10 分鐘。
4．洗脫液中有乙醇殘留。在使用Buffer RWB進行RNA Spin Column清洗后沒有進行后續(xù)的離心過程，造成乙醇殘留，使RNA的收量下降。建議在使用Buffer RWB清洗后再進行一次離心，以去除殘留的乙醇。
如果提取時發(fā)生降解，則可能有以下幾種原因：
1．使用的組織材料不夠新鮮。應(yīng)使用新鮮的組織材料，或?qū)⑿迈r的組織材料用液氮迅速冷凍后置于-80℃保存。
2．提取RNA時使用的試劑及器具中混有RNA分解酶。實驗前請參考“預防RNase污染的注意事項”，以避免RNase 污染。
3．提取的組織材料中含有大量RNA分解酶。RNA分解酶較多的組織或細胞應(yīng)當減少樣品起始量，并加大Buffer RL用量。
本試劑盒提供了去除基因組DNA的gDNA Eraser Spin Column，能夠很好地去除材料中的基因組DNA，一般不會含有基因組DNA的污染。如果提取的RNA中含有基因組DNA污染，則可能有以下幾種原因：
1．樣品裂解不充分。樣品不充分裂解會造成基因組DNA的殘留。樣品的裂解方法請參考操作方法中的組織或細胞的裂解。
2．樣品起始量過多。過多的起始量使得核酸含量過多，超過gDNA Eraser Spin Column的承載量，造成基因組DNA殘留。請參考“不同組織的最佳起始量和裂解Buffer RL使用量”。
3．樣品的基因組DNA含量過高。不同組織中基因組DNA的含量不同，對于基因組DNA含量較高的樣品，請減少樣品起始量，并增加提取時Buffer RL的用量。
4．未進行DNase I的消化處理。對于部分基因組DNA含量較高的組織材料或后續(xù)實驗對RNA純度要求比較嚴格，則需進行DNase I的消化處理。請參考操作方法，進行DNase I的消化處理。
有關(guān)RNA的吸光度說明如下：
260 nm、320 nm、230 nm、280 nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白質(zhì)等有機物的吸光度值。OD260/OD280（R）體現(xiàn)了RNA中的蛋白質(zhì)等有機物的污染程度，質(zhì)量較好的RNA的R值應(yīng)在1.8～2.0之間，當R<1.8時，溶液中蛋白質(zhì)等有機物的污染比較明顯；當 R>2.2時，說明RNA已經(jīng)被水解成了單核苷酸。
在對核酸進行吸光度檢測時，需要注意稀釋液應(yīng)使用TE Buffer。
RNA的濃度可以根據(jù)吸光度進行計算：
RNA濃度=（OD260-OD320）×稀釋倍數(shù)×0.04 μg/μl 。
使用本試劑盒能夠有效提取分子量大于200 nt的RNA。對于分子量小于200 nt的RNA，使用本試劑盒不能很好地提取。
本試劑盒只能進行簡單的基因組DNA提取?；蚪MDNA的收量相對較低，可以進行簡單的PCR擴增。當材料的基因組DNA不易提取、基因組DNA含量較低或者后續(xù)實驗對基因組DNA要求較高時，請選用TaKaRa MiniBEST Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.5.0（Code No. 9765）進行提取，本試劑盒不承諾提取效果。
裂解組織時，可以根據(jù)不同組織材料采取不同的裂解方式，如液氮研磨、組織勻漿器、組織破碎儀（NEXT ADVANCE BBX24B）、電動研磨器BioMasher（nippi）、一次性組織研磨杵等。一般的動物組織，如肝臟、胰臟、腦等易于破碎的材料，使用本試劑盒，經(jīng)驗證上述方法均適用，且RNA的收量及純度差別不明顯；但對于植物組織及肌肉等富含纖維的組織材料，仍建議客戶使用液氮研磨等較為劇烈、充分的破碎方法，以保證組織材料的充分裂解；當組織材料量較少（不易獲得）時，建議客戶使用組織破碎儀（NEXT ADVANCE BBX24B）、電動研磨器BioMasher（nippi）或一次性組織研磨杵等在裂解過程中不易丟失組織材料的裂解方法。
頁面更新：2020-04-30 10:30:08
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