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機構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

Q-1：提取的RNA中含有多糖怎么辦？
A-1：

大多數(shù)的植物及動物肌肉組織中都含有大量多糖，因此很難將其從RNA中除去，使用此類組織材料提取RNA時，建議增加RNAiso Plus的使用量。
對于從含有大量多糖的植物樣本中提取RNA時，推薦使用Fruit-mate for RNA Purification (Code No. 9192)作為預(yù)處理試劑。在異丙醇沉淀純化步驟中加入High-Salt Solution for Precipitation (Plant) (Code No. 9193)可有效除去RNA溶液中的多糖。

Q-2：OD260/OD280<1.65，為什么?
A-2：

1. RNA應(yīng)使用TE Buffer稀釋后再進行吸光度值的測定，低離子強度或低pH值會使OD280值升高
2. 樣品裂解時加入的RNAiso Plus量偏少，造成蛋白分離不充分，可以再次對RNA溶液進行處理，以除去蛋白。
3. 含有裂解液的樣品經(jīng)勻漿混勻后未在室溫靜置，或靜置的時間不足5分鐘。這一步是從核酸中分離核蛋白的重要步驟。
4. 相分離后，吸取上清液時不小心接觸蛋白層造成污染。
5. RNA未充分溶解。

Q-3：如何計算RNA的濃度?
A-3：

RNA濃度=（OD260-OD320）×稀釋倍數(shù)×0.04 μg/μl。

Q-4：提取的RNA不溶怎么辦?
A-4：

提取的RNA不溶，有以下幾點原因：
1．75%乙醇清洗沉淀后不要干燥時間過長或加熱干燥。
2．可以于60℃加熱5分鐘后再于冰上溶解數(shù)小時。

Q-5：提取的RNA降解了，為什么?
A-5：

提取的RNA降解，有以下幾點原因：
1．使用的組織材料不夠新鮮。提取RNA的組織材料應(yīng)采用新鮮的組織材料，或?qū)⑿迈r組織材料用液氮迅速冷凍后置于-80℃保存。
2．提取RNA時使用的試劑及器材中混有RNA分解酶。
3．提取的組織材料中含有大量的RNA分解酶，而RNAiso Plus的添加量不夠。

Q-6：提取的RNA中含有DNA污染，為什么?
A-6：

提取的RNA中含有DNA污染，有以下幾點原因：
1．裂解組織或細胞使用的RNAiso Plus量偏少。
2．使用的組織材料中含有大量的有機溶劑（如：乙醇、異丙醇等）、高濃度的Buffer、堿性溶劑等。
3．如果提取的RNA中含有DNA時，可以使用Recombinant DNase I（RNase Free）（Code No. 270A）進行DNA消化。

Q-7：使用RNAiso Plus，加入氯仿振蕩離心分層后，上清液一定是無色的嗎?
A-7：

不一定。上清液的顏色與提取的材料種類有關(guān)系，有的時候會因為帶有材料本身的色素而帶有一定的顏色，但是經(jīng)過后續(xù)的純化，提取的RNA一般不會帶有顏色的，不影響RNA的純度。

Q-8：使用RNAiso Plus一般情況下的組織或細胞中所能提取的RNA量是多少?
A-8：

不同材料的RNA提取量請見下表：

 
組織材料 起始樣品量 Total RNA提取量
全血 1 ml 15～20 μg
白細胞 1×107個 約20～40 μg
小鼠肝臟 1 g 約4,000～5,000 μg
HL-60培養(yǎng)細胞 1×107個 約100 μg
煙草葉片 1 g 約1,000 μg
小鼠腎臟 1 g 約3,000 μg
小鼠骨骼肌 1 g 約1,500 μg
小鼠腦 1 g 約1,500 μg
鯉魚骨骼肌 1 g 約50 μg
  *：100 μl全血使用1 ml RNAiso Plus
如果收量少于預(yù)期，可能由于以下原因：
1、加入RNAiso后研磨不充分
2、三相分層時，上清液取量過少
3、RNA沉淀沒有完全溶解
4、在異丙醇沉淀或清洗步驟存在RNase污染

頁面更新：2020-04-30 11:07:48