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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

Q-1：使用RNAiso Blood得到的RNA收量少，為什么?
A-1：RNA收量因樣品不同而不同。利用RNAiso Blood從0.25 ml液體樣品或50 mg含水量較高的植物中所能提取的RNA量如下表：
組織材料 起始樣品量 Total RNA提取量
人全血 0.25 ml 1～10 μg
小鼠全血 0.25 ml 1～10 μg
牛全血 0.25 ml 1～10 μg
鯉魚全血 0.25 ml 10～100 μg
菠菜葉片 50 mg 30～60 μg
西紅柿果實(shí) 50 mg 1～10 μg
橘子 50 mg 1～10 μg
如果收量少于預(yù)期，可能由于以下原因：
a、加入RNAiso Blood后勻漿不充分；
b、三相分層時(shí)，上清液取量過少；
c、RNA沉淀沒有完全溶解；
d、在異丙醇沉淀或清洗時(shí)存在RNase污染；
e、在異丙醇沉淀或清洗時(shí)RNA沉淀流失；
·異丙醇沉淀時(shí)建議使用Dr．GenTLE® Precipitation Carrier（Code No. 9094）
f、水分含量少的組織樣品，沒有經(jīng)過稀釋直接使用RNAiso Blood進(jìn)行了RNA提取。
·水分含量少的組織樣品，添加RNA-free水使樣品體積至0.25 ml，再加入RNAiso Blood進(jìn)行RNA提取。
Q-2：使用RNAiso Blood得到的RNA，OD260/OD280值<1.65?
A-2：

1．RNA應(yīng)使用TE Buffer稀釋后再進(jìn)行吸光度值的測(cè)定，低離子強(qiáng)度或低pH值會(huì)使OD280值升高。
2．樣品加入RNAiso Blood經(jīng)勻漿后，在室溫靜置5分鐘，這一步是從核酸中分離核蛋白的重要步驟。
3．吸取上清液時(shí)，注意槍頭不要接觸中間蛋白質(zhì)層。
4．提取的RNA未充分溶解。

Q-3：使用RNAiso Blood得到的RNA不溶解，為什么?
A-3：

1．若75%乙醇清洗沉淀后干燥時(shí)間過長(zhǎng)，則RNA沉淀會(huì)難以溶解。避免加熱或長(zhǎng)時(shí)間干燥沉淀。
2．可以于60℃加熱5分鐘后再于冰上溶解數(shù)小時(shí)可有助于沉淀溶解。

Q-4：使用RNAiso Blood提取的RNA已降解，為什么?
A-4：

1．RNA提取用樣品，應(yīng)采用新鮮的組織材料，或?qū)⑿迈r的組織材料用液氮迅速冷凍后置于-80℃保存。
2．提取RNA時(shí)使用的樣品及器皿中混有RNA分解酶。

Q-5：使用RNAiso Blood提取的RNA中有DNA污染，為什么?
A-5：

1．使用的樣品中含有大量的有機(jī)溶劑（如：乙醇、異丙醇等）、高濃度的緩沖液、堿性溶劑等。
2．如果提取的RNA中含有DNA時(shí)，可以使用Recombinant DNase I (RNase-free)（Code No. 2270A）進(jìn)行DNA消化。

Q-6：提取的RNA中含有多糖怎么辦?
A-6：

對(duì)于從含有大量多糖的植物樣本中提取RNA時(shí)，建議使用Fruit-mate™ for RNA Purification （Code No. 9192）作為預(yù)處理試劑。在異丙醇沉淀純化步驟中加入High-Salt Solution for Precipitation（Plant）（Code No. 9193）可有效除去RNA溶液中的多糖。

頁(yè)面更新：2020-05-06 10:18:04